GB/T5413.2-1997自ii言本标准参考了日本森永公司的乳清蛋自测定方法。本系列标准从实施之日起，代什GB5413-85}本标准山中国轻_卜总会提出。本标准山全国乳.甘.标准化中心归日。本标准负责起草单位:哈尔滨森水乳，}}。有限公司、国家乳制.甘.质量监督检验中心。本标准参加起草单位:PL部食.".V,UI生监督检验所、浙江省轻「业研究所、雀巢(中国)投资服务有限公司。本标准卞要起草人:」几丽坤、张燕杰、赵勤。中华人民共和国国家标准婴幼儿配方食品和乳粉GB/T5413.2-1997乳清蛋白的测定代并GB5413-85MilkpovAerandformulafoodsforinfantandyoungchildren-Determinationofwheyprotein范围本标准规定了酪蛋自‘J乳清蛋白含量比率的测定方法。本标准适用」几婴幼儿配方食.11it.和乳粉中酪蛋白与乳清蛋自含量比率的测定。方法提要试样用SDS-聚苯烯酸胺凝胶电泳(SDS-PAGE,Laemmli法)后，用光密度计对按分子量顺序分离开的酪蛋白‘J乳清蛋自各谱带进行测定，求得酪蛋白与乳清蛋自的含量比率。试剂所有试剂，如未注明规格，均指分析纯;所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1电泳缓冲液:将Tris(hydroxymethyl)aminomethane7.5g、甘胺酸36g,SDS2.5g溶J,-A馏水中，定容至500ML。使用前以蒸馏水稀释5倍后使用。3.2SDS试样缓冲液:0.125mol/LTrsi一盐酸(pH6.8)，体积分数20%的甘油，4Yo(m/V)SDS，体积分数IOyo2-mercaptoethanol，质量分数0.0025%的浪酚蓝(bromophnolblue).3.3染色剂:质量分数0.I%考马斯蔽R-250(CoomassicbrilliantblueR-250)，体积分数10%的甲醉，体积分数7.5%的乙酸.3.4脱色剂:体积分数10%的甲醉，体积分数7.5%的乙酸。3.5酪蛋白。3.6精制乳清蛋I'I(WPC).3.7SDS-PAGE:用梯度凝胶(10%-20%)或同效凝胶。仪器常用实验室仪器及:4.1平板式电泳槽。4.2供电设备。4.3光密度计。操作步骤5.1样液的制备将试剂按蛋白质10-2印9爪L的浓度范围溶解在蒸馏水中。加入与试样同体积的SDS试样缓冲国家技术监督局1997-05-28批准1998-09-01实施GB/T5413.2-1997液，在煮沸热水中静置5min后，作为试样液。5.2标准溶液的制条使用前，酪蛋白和乳清蛋白的蛋自质浓度按凯氏(Kjeldahl)法精确测定。将酪蛋自和乳清蛋白按上述方法分别进行溶解和处理后作为标准溶液。此外，还可将酪蛋自与乳清蛋白的标准溶液按蛋白质含量的任意比率(比如蛋自质的浓度比为75:25,50:50,25:75)进行混合作为混合标准溶液。53电泳将凝胶设置在电泳槽中，加入电泳缓冲液。试样溶液与标准溶液...
