细胞信号转导的技术方法[公众微信号：bioworlde].pptVIP免费

FirstMilitaryMedicalUniversity细胞信号转导的技术方法FirstMilitaryMedicalUniversityFirstMilitaryMedicalUniversity蛋白激酶磷酸化及其活性测定FirstMilitaryMedicalUniversity蛋白激酶磷酸化的检测裂解培养的细胞获得裂解上清裂解培养的细胞获得裂解上清以免疫共沉淀法获得蛋白激酶以免疫共沉淀法获得蛋白激酶SDS-PAGESDS-PAGE再加入蛋白激酶磷酸化特异性抗体再加入蛋白激酶磷酸化特异性抗体以以PhosphoAb-HRPWesternPhosphoAb-HRPWestern化学发光检化学发光检测试剂盒测定蛋白激酶的磷酸化程度。测试剂盒测定蛋白激酶的磷酸化程度。FirstMilitaryMedicalUniversity经典蛋白激酶活性分析实验流程以免疫共沉淀法获得蛋白激酶以免疫共沉淀法获得蛋白激酶加入该激酶底物和加入该激酶底物和32-ATP-ATP，激酶使底，激酶使底物磷酸化物磷酸化放射自显影，确定磷酸化条带放射自显影，确定磷酸化条带FirstMilitaryMedicalUniversity以免疫共沉淀法获得蛋白激酶以免疫共沉淀法获得蛋白激酶加入该激酶底物，激酶使底物磷酸化加入该激酶底物，激酶使底物磷酸化再加入底物磷酸化特异性抗体再加入底物磷酸化特异性抗体以以PhosphoAb-HRPWesternPhosphoAb-HRPWestern化学发光化学发光检测试剂盒测定底物的磷酸化程度，进检测试剂盒测定底物的磷酸化程度，进而推出蛋白激酶活性而推出蛋白激酶活性非放射性蛋白激酶活性分析实验流程FirstMilitaryMedicalUniversity较传统激酶活性测定方法的优点较传统激酶活性测定方法的优点无需接触放射性物质无需接触放射性物质敏感度高：可以检测到每个磷酸化分子敏感度高：可以检测到每个磷酸化分子特异性：利用磷酸化特异性抗体可以进行位点特异性：利用磷酸化特异性抗体可以进行位点特异性分析特异性分析信噪比高信噪比高低背景低背景系统完整：提供一整套直接从细胞裂解液中测系统完整：提供一整套直接从细胞裂解液中测试酶活的试剂试酶活的试剂节约时间：由几天降到几分钟节约时间：由几天降到几分钟FirstMilitaryMedicalUniversity02468101214051020306090120Time(min)RelativekinaseactivityDynamicprocessesofp38activationbyLPSinRAWcellsFirstMilitaryMedicalUniversityEffectofindividualMAPKpathwaysEffectofindividualMAPKpathwaysonPRAKactivityinintactcellsonPRAKactivityinintactcellsMKK7(D)GST-ATF2GST-ELK1MKK1(E)MKK6(E)ControlHSP27PRAKFirstMilitaryMedi...