腺病毒载体操作手册中文版腺病毒重组系统AdEasyTM操作手册目录第一章简介第二章应用重组腺病毒的优点第三章AdEasyTM技术3.1技术概况3.2AdEasyTM系统中产生重组腺病毒的时程第四章主要流程4.1将基因克隆入AdEasyTM转移载体4.1.1克隆的一般原则4.1.2构建重组AdEasyTM转移载体4.2细菌内AdEasyTM重组子的产生4.2.1共转化的一般原则4.2.2共转化方法4.2.3预期结果4.3AdEasyTM重组质粒的筛选和扩增4.4AdEasyTM重组子转染QBI-293A细胞4.4.1细胞铺板4.4.2磷酸钙转化技术第五章常用技术5.1QBI-293A细胞培养5.1.1QBI-293A细胞的初始培养5.1.2QBI-293A细胞的维持培养和增殖5.1.3QBI-293A细胞的冻存5.2QBI-293A细胞的转染和病毒空斑的产生5.2.1感染QBI-293A细胞5.2.2病毒空斑形成5.2.3琼脂糖覆盖被感染细胞5.3MOI测定5.4腺病毒感染力测定5.4.1X-Gal染色5.5重组腺病毒的筛选和纯化5.5.1挑选最佳重组腺病毒：表达和基因输送5.5.2病毒空斑挑选和小量扩增5.5.3Western杂交5.5.4Southern杂交和点杂交5.5.5病毒裂解产物5.5.6免疫测定5.5.7功能测定5.6病毒颗粒在QBI-293A细胞中的大量扩增5.7两次氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒5.7.1不连续密度梯度离心5.7.2连续密度梯度离心5.7.3病毒溶液去盐和浓集5.8病毒滴度测定5.8.1O.D.260nm(VP/ml)5.8.2空斑测定法5.8.350%组织培养感染剂量法第六章疑难解答6.1QBI-293A细胞培养6.2感染力测定6.3转移载体克隆6.4在BJ5183细胞中共转化和重组6.5转染QBI-293A细胞6.6筛选和测定6.7在QBI-293A细胞中表达6.8重组腺病毒的扩增6.9纯化6.10病毒滴度测定缩写英文全称中文全称AdAdenovirus腺病毒Ad5Adenovirusserotype5血清5型腺病毒AdVAdenoviralVector腺病毒载体AmpAmpicillin氨苄青霉素β-Galβ-Galactosidaseβ-半乳糖苷酶bpBasePair碱基对BSABovineSerumAlbumin小牛血清白蛋白cDNAComplementaryDNA互补cccDNAClosedCircularCoiledDNA闭环螺旋CPECytopathicEffect细胞病理效应CsClCesiumChloride氯化铯DMEMDulbecco’sModifiedEagleMediumDMEM培养基DMSODimethylSulfoxide二甲基亚砜DTTDithiothreitol二硫苏糖醇EDTAEthyleneDiamineTetraaceticAcid乙二胺四乙酸EtBrEthidiumBromide溴化乙锭FBSFetalBovineSerum胎牛血清HrHour小时GRITRInvertedTerminalRepeat反向末端重复KanKanamycin卡那霉素kbKilobases千碱基对KDaKiloDaltons千道尔顿LBLuria-Bertani(broth)LB培养基MCSMultipleCloningSite多克隆位点MinMinute分钟MOIMultiplicity...
