中华人民共和国国家标准(633.，+633.85).001.4粮食、油料检验过氧化氢酶活动度测定法InspectionofgrainandoilseedsMethodsfordeterminationofhydrogenperoxidaseactivity5522-85本标准适用于商品粮食过氧化氢酶活动度的测定。1仪班和用具恒温水浴锅，电炉;离心机或吸滤装置，锥形瓶:100MIr量筒:10,15m1;移液管:5,10,20m1i研钵，滴定管、细口瓶、漏斗等。...，﹄.曰月，﹄合目..…‘.‘.....心.口.j.月.::;2试荆2.12。22。32.43%过氧化氢溶液;10%硫酸溶液，o.iN高锰酸钾溶液，取30%过氧化氢溶液3m1加水稀释至30m卜pH7.7索伦逊磷酸盐缓冲液:甲液，称取磷酸氢二钠11.8768溶于11水中。乙液，称取磷酸二氢钾9.0788溶于1l水中。临用时，甲、乙液按9:1混合。2.5石英砂或用干净的玻瑞片研制成的细砂。吕操作方法3.1过氧化氢酶的提取:称取试样(能换算成无水试样1g)，放入研钵中，加少量细砂，量取缓冲液50m1，先倒出5-10ml于研钵中研磨试样，然后经漏斗倒入锥形瓶中，用剩余的缓冲液洗净研钵和漏斗，再把洗液倒入锥形瓶内，振摇后静置2-3h，用吸滤法或离心沉淀法获得透明的提取液。3.2酶活动度的测定:摇匀提取液，吸取20ml注入锥形瓶中，加入20m1水和3m13%过氧化氢溶液，在室温下放置15-30min，加入5m110%硫酸溶液，摇匀，用。.1N高锰酸钾溶液滴定剩余的过氧化氢，记下用去的高锰酸钾溶液毫升数(VO。3.3对照试验:吸取20m1提取液注入锥形瓶中，置于沸水浴中加热5min，或用直接煮沸法破坏过氧化氢酶。加20。工水和3m13%过氧化氢溶液于锥形瓶中，在室温下放置15-30min，再加入10%硫酸5m1，摇匀，用0.1N高锰酸钾溶液滴定，记下用去的毫升数(YP)。国家标准局，985-11-02发布1888-0T-01实施GB5522-85A结果计算过氧化氢酶活动度按下列公式计算:过氧化氢酶活动度(mgHiOz/比试样)=(V一V,)xNx17x器式中:V,-酶活动度测定时所用的。.1N高锰酸钾溶液体积，M),V}—对照试验时用去的O.1N高锰酸钾溶液体积，m场N—高锰酸钾溶液当量浓度;17-HzO:的毫克当量。双试验结果允许差不超过平均值的10%，取平均值为测定结果。测定结果取小数点后第一位。附加说明:本标准由中华人民共和国商业部提出。本标准由商业部粮食储运局负责起草。本标准主要起草人高修吾、杨浩然、吴艳霞、吕桂芬。
