教你如何做好PCR产物污染预防一、规范行为建立PCR实验SOP，规范实验人员行实验员严格遵守操作流程，在操作上最大程度地降低人为因素可能导致的PCR污染或杜绝污染的出现。另外实验员应当具备相应的专业知识和技能，包括熟练操作相关设备、明确整个工作流程、掌握出现污染情况的处理方法和实验室质量控制方法，以及能够正确解释检测结果。二：规范实验室建立标准的PCR实验室。PCR实验室原则上分为四个区域，即试剂准备区、样品处理区、扩增区、扩增产物分析区，前两区为扩增前区，后两区为扩增后区。扩增前区与扩增后区应严格分开。实验材料、试剂、记录纸、笔、清洁材料等，只能从扩增前区流向扩增后区，即从试剂准备区→样品处理区→扩增区→扩增产物分析区，不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区，不得逆向流动。理想的PCR实验室设计如下图：图A和图B所给出的PCR实验室设置图应是较为理想的设置模式，有条件的实验室可参照此种模式设计。对于一般的普通实验室，建议PCR扩增区和产物分析区能够分隔开，在样本制备区和PCR扩增区尽可能地减少开盖操作。切记：产物分析区的产物及实验用品严禁拿到样本制备区和PCR扩增区。三：减少实验步骤如果实验室只是进行PCR检测鉴定，建议使用荧光定量PCR取代常规PCR。荧光定量PCR检测结果可以通过荧光信号采集分析，因此反应结束后不需要开盖电泳，避免了反应产物泄露形成气溶胶而造成的PCR产物污染。如果进行凝胶电泳上样步骤时增加开盖次数，易产生气溶胶污染。建议推进定量PCR的应用，并逐步替代定性PCR。四：采用UNG防污染体系采用UNG防PCR产物污染体系进行PCR反应。体系采用dUTP取代dTTP，PCR反应之后，所有的PCR产物(DNA片段)均掺有了dUTP；在下一轮PCR反应时，体系中添加的UNG酶，在PCR前37°C孵育5min，能特异的降解所有含有dUTP的DNA片段，之后再进行PCR反应。这样能完全去除由PCR产物引起的气溶胶污染。效果见下图：注：直接PCR系列可以选用福际生物的防PCR产物污染体系系列产品建议对于大规模进行基因分型检测的实验室，强烈推荐在建设合理的实验室之外，检测试剂使用UNG防PCR产物污染体系。
