Transbody-侵袭1.细胞被干预后（药物处理、转染、电转、感染）适当时间点（考虑上述处理因素起作用的时间，Transbody检测时间窗口为16-24小时），作活细胞计数（台盼蓝染色），把适量活细胞（1-3万个）接种至Transbody中，注意细胞接种一定要均匀，如果是药物处理，要考虑是否继续加药处理，如果是转染，电转，感染，不再进行第二次处理；2.配制包被缓冲液：0.01MTris(pH8.0),0.7%NaCl，0.22um滤膜过滤除菌；Matrigel在4°C下冻融过夜，溶解后充分摇匀，然后立即放在冰上，一旦升温，容易凝固；包被缓冲液在4°C预冷至少2h，枪头和EP管在-20°C下提前预冷过夜；3.用包被缓冲液把Matrigel稀释为200-300μg/ml，需要多少稀释多少（可以多稀释100ul），快速混匀，立即放在冰上；每个transwell孔加入100ul，要保证孔底与Matrigel充分接触，避免Matrigel与孔壁接触；避免产生气泡，如果有气泡，可300xg，10minutes，4°C离心；包被过夜后，吸走剩余的液体，用培养基润洗1-2遍；上室加入细胞（100ul无血清培养基，1-3万），下室加入完全培养基600ul；37度5%CO2培养24小时；4.用棉签擦去上室内的细胞，用PBS把上室内的细胞残留；结晶紫染色10min,洗涤残留的染液；把膜剪下，晾干后，用中性树脂封闭于载玻片，拍照，随机拍至少6个视野，用软件对图片进行细胞计数，然后对数据进行统计分析；注意事项：1.选择合适直径（Transwell的大小，常用的6.5mm,为24孔格式，上述实验适用的是常用格式）和孔径（膜的孔径，一般有0.3um(用于细胞间接共培养),4um（用于血细胞分析）,8um（用于肿瘤细胞和其他组织细胞分析））的Transwell，Transwell被Matrigel包被后称为Transbody；2.何时把处理后的细胞接种至Transbody？决定于处理因素起作用的时间；3.细胞接种的数量？细胞的大小和侵袭速度，考虑通过预实验确定；4.为何要把细胞接种均匀？如果接种不均匀，后面无法用软件对图片进行细胞计数；5.细胞接种至Transbody是否继续进行细胞干预？决定于处理因素起作用的时间；6.Transbody检测时间窗口如何确定？接种至Transbody后，定时观察，随时根据细胞侵袭的情况结束实验；7.提前一天解冻Matrigel；提前一天准备预冷的枪头和EP管（其包装盒必须用胶带封闭，再把包装盒置于洁净灭菌盒子中，再放到-20°C预冷）；Transwell被Matrigel包被时，必须充分准备，操作快速，冰上操作；8.注意上室和下室加入培养的量和种类；
