湿转是一种传统方法，将胶/膜叠层浸入缓冲液槽然后加电压。这是一种有效方法但比较慢，需要大体积缓冲液且只能用一种缓冲液。另外用这种方法转移双向电泳中常规使用的大胶比较困难。湿转操作步骤：1、起胶：将凝胶从玻璃板中取出，切除积层胶及溴酚蓝下部的分离胶，剩下的含有目的蛋白的分离胶浸泡于转膜缓冲液中，防止胶凝固、变形。2、润湿：准备2张Whatman3#滤纸、1张NC膜，尺寸与凝胶大小相仿（滤纸与胶一样大，膜比胶大一些），NC膜先放入水中3分钟，再放入转膜缓冲液中10分钟。（若用PVDF膜，应先在100%甲醇中浸泡，否则很难润湿。甲醇可反复利用。）3、三明治的制作：按顺序在转移夹内放置预先经转移缓冲液浸泡的海绵、1层Whatman3#滤纸、凝胶、硝酸纤维素膜、1层Whatman3#滤纸、海绵，保证每层之间没有气泡。组装顺序：转膜夹黑色面（负极）－海绵垫－滤纸－胶－膜－滤纸－海绵垫－红色面（正极）切记：每层之间用滴管/玻棒将其中的气泡全部赶出，绝不允许气泡存在！4、转膜：将转移夹放入转移槽，加入4℃预冷的转膜缓冲液，将凝胶面与负极相连，硝酸纤维素膜与正极相连。关于转膜电流和时间:一般转膜的电流在200mA-400mA之间，转膜时间为30-60分钟。也可以在15-20mA转膜过夜。大片段的>50KD的可以选用350mA,小片段的可以用250mA,上述电流均能很好的把大部分蛋白转过去。具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的转膜时间越长，目的蛋白的分子量越小，需要的转膜时间越短。关于转膜的注意事项：1.胶在负极，膜靠近正极；2.转膜缓冲液一定要事先预冷，最好提前一天配好放4℃冰箱；4.滤纸不要大过膜，防止短路；5.夹好膜和凝胶后，确定在凝胶/膜和滤纸之间没有气泡存在，否则会导致转膜不完全；6.注意一定要戴手套或用塑料镊子接触膜，因为手上的蛋白和油脂会影响转膜效率并会使膜脏掉；7.在转膜过程中，特别是高电流快速转膜时，通常会有非常严重的发热现象，最好把转膜槽放置在冰浴中进行转膜。33、半干转移用浸透缓冲液的多层滤纸代替缓冲液槽。因为电极板直接与滤纸接触，使凝胶中电场强度尽可能大以快速高效转移。与湿转相比，这种方法又快（15-45分钟）又好。多数半干转移方法使用一种以上的缓冲系统，可以同时高效转移大小不同的蛋白。然而，半干转移系统因缓冲液较少不适于长时间转移。半干转操作步骤与湿转基本类似，区别在于两边都是3层Whatman3#滤纸，转移电压和时间也有所不同。半干转移系统中，滤...
