解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn13D肿瘤球形成实验1.实验原理肿瘤球(tumorsphere)是肿瘤细胞在无血清的培养条件下经表皮生长因子(epidermalgrowthfactor，EGF)和碱性成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgrowthfactor,bFGF）等多种细胞生长因子诱导形成的悬浮生长的细胞团块。肿瘤球用于肿瘤方面的研究已有40余年，被公认为肿瘤研究最好的细胞模型之一。肿瘤球的直径一般超过400μm，由不断增生的外层细胞和由于氧气和营养物质传输的限制而处于静止期的内层细胞构成。与传统的单层平面培养的肿瘤细胞相比，肿瘤球的三维空间结构可以为体外生长的肿瘤细胞提供类似体内生长环境的生物支撑或基质，并建立细胞之间及细胞与细胞外基质间相互联系。传统的单层平面培养的肿瘤细胞则由于结构过于简单，缺乏合适的生理学载体和结构力学特性，与体内正常生长的细胞相距甚远。因此，在肿瘤的侵袭、转移的体外研究和药物的高通量筛选方面，肿瘤球已经逐步代替平面培养的肿瘤细胞成为肿瘤体外研究中常用的模型之一，同时，肿瘤细胞悬浮成球实验被认为是获取具有干性肿瘤细胞的试验之一。2.实验目的通过少量细胞能否持续形成3D肿瘤球来判断肿瘤细胞的增殖能力和细胞干性。3.实验材料3.1.主要试剂培养基（可根据细胞选择，见细胞系列表），0.25%EDTA的胰酶，灭菌的1xPBS，2%B27，1%N2,20ng/ml人源的bFGF和50ng/ml重组人源的EGF，4μg/mlheparin（可选）。解螺旋http://www.helixlife.cn/3.2.主要仪器细胞培养箱，离心机，培养皿，低粘附6孔板或者24孔板，电动/普通移液枪，计数器。3.3.其他sphere在静止的悬浮状态下是不会动的。建议先用显微镜取几个视野拍照后再计数。解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn24.实验步骤（以胰腺癌细胞3D肿瘤球形成实验为例）1.将处于对数生长期的胰腺癌细胞用0.25%EDTA的胰酶消化，并1xPBS清洗一遍，用基础培养基解螺旋http://www.helixlife.cn/2.2000个胰腺癌细胞均匀铺在24或者6孔的超低黏附细胞培养皿（取决于自己的实验具体条件，原则是不能让细胞长的过满。40天以后照相要清晰可见不同的3D肿瘤球。也不能铺太少的细胞，比如xx基因敲除掉的细胞本来长的就慢。）。3.去血清处理的培养基包含2%B27，1%N2,20ng/ml人源的bFGF和50ng/ml重组人源的EGF,培养细胞7到10天，中间3-4天换一次培养基。4.更换培养基时候，把已经形成的肿瘤球用1ml的枪头吸附到试管中，用1xPBS清洗2次，去除1xPBS,加入0.25%胰酶消化...
