蛋白质的研究方法与原理baishasha@gzucm.edu.cn主要内容蛋白质的理化性质蛋白质的分离与纯化技术蛋白质含量的测定方法蛋白质结构分析方法蛋白质功能分析方法氨基酸——多肽链——蛋白质一级结构、二级结构、三级结构、四级结构分子量溶解度所带电荷亲水性理化性质蛋白质的四级结构氨基酸——多肽链——蛋白质一级结构、二级结构、三级结构、四级结构分子量等电点活性理化性质蛋白质分离纯化蛋白质纯度鉴定和含量测定结晶或蛋白质干粉精制（层析法或电泳法）分级沉淀（盐析法或有机溶剂法）用适当的缓冲液抽提破碎生物组织制备过程中注意事项：要求自始至终保持在天然状态避免一切过激因素--过酸或过碱，高温，重金属等的影响。通常都在低温条件下操作。尽可能使样品中蛋白质的浓度维持在较高水平。蛋白质的分离与纯化技术溶解度分子量所带电荷特殊亲和性疏水性蛋白质沉淀与结晶（一）盐析法利用高浓度的中性盐将蛋白质从溶液中洗出的方法叫盐析（saltingout）。原理：中性盐的亲水性强，可以破坏蛋白质表面的水化膜，中和蛋白质所带电荷，破坏蛋白质的胶体性质，使其溶解度下降而析出。各种蛋白质盐析所需的盐浓度及PH不同，改变盐的浓度及溶液的PH值可使混合液中的蛋白质依次分批沉淀，称为分段盐析法。蛋白质沉淀与结晶（一）盐析法优点：操作简便对易变性的蛋白质有一定的保护作用，适用范围十分广泛。缺点：分辨能力差，纯化倍数低对同一种Pr而言，价数愈高的盐离子，盐析能力也愈强常用的中性盐有如硫酸盐、磷酸盐等蛋白质沉淀与结晶（二）有机溶剂沉淀法常使用与水互溶的有机溶剂。原理：在PI附近，Pr主要以中性离子形式存在。此时若添加有机溶剂，由于有机溶剂可使溶液电离常数减小，增强了蛋白质分子间的相互吸引，导致溶解度下降；有机溶剂本身的水合作用会破坏Pr表面的水合层，也促使Pr变得不稳定而聚集析出.常用的有机溶剂：乙醇、丙酮、正丁醇蛋白质沉淀与结晶（二）有机溶剂沉淀法利用不同的蛋白质在不同的有机溶剂或同一种有机溶剂不同浓度时溶解度的差异而达到分离的方法称作有机溶剂分段沉淀法。操作时溶液的PH值大多控制在蛋白质的等电点附近。高浓度的有机溶剂易引起蛋白质变性，因此:低温操作；迅速混匀；添加中性盐；尽快除去有机溶剂。蛋白质沉淀与结晶（三）选择性沉淀法选择一定的条件使其它蛋白质变性沉淀而不影响目标蛋白质的分离方法。例如，将提取液...
