临床医学检验技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》第十三章免疫组织化学技术第一节概述第二节免疫荧光组织化学技术第三节酶免疫组织化学技术第四节亲和组织化学染色第五节免疫标记电镜技术第六节免疫组织化学技术的应用第一节概述免疫组织化学技术又称免疫细胞化学技术，是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性和分子生物学技术的敏感性等巧妙地结合在一起，为疾病的诊断、鉴别诊断和发病机制的研究提供了强有力的手段。免疫组织化学（简称免疫组化）技术中根据标志物的不同，可分为免疫荧光组织化学技术、酶免疫组织化学技术、免疫金（银）组织化学技术、亲和免疫细胞化学技术、免疫电子显微镜技术。免疫组织化学的基本过程包括：①抗原的提取与纯化；②免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化；③将标志物与抗体结合形成标记抗体；④标本的处理与制备；⑤抗原抗体免疫学反应以及标志物呈色反应；⑥观察结果一、标本的处理（一）标本的主要来源1.活体组织；2.各种体液、穿刺液；3.培养细胞。（二）标本的固定与保存1.标本固定的目的；2.固定剂的选择；3.制片方法的评价；冷冻和石蜡切片是免疫组化最常用的制片方法。二、抗原的保存与修复1.酶消化法；2.盐酸水解法；3.微波法；4.高压锅法；5.煮沸法。第1页临床医学检验技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》三、抗体的处理与保存（一）抗体的选择选择抗体时应注意选择具有高度特异性和稳定的优质抗体，根据需要决定采用单克隆或多克隆抗体。多克隆抗体广泛用于石蜡包埋的组织切片，假阴性几率低，但特异性不如单克隆抗体，有时会造成抗体的交叉反应。单克隆抗体特异性强，但敏感性不够高。（二）抗体的稀释抗原抗体反应要求有正确的比例，过量或不足均不能达到预期结果。实际操作中需进行预实验，摸索抗体的最佳稀释度，以便达到最小背景染色下的最强特异性染色。（三）抗体的保存抗体是一种具有生物活性的蛋白质，在保存抗体时，要特别注意保持抗体的生物活性，防止抗体蛋白质变性，否则会降低抗体效价，甚至失效。四、免疫组化的结果判断（一）对照的设立设立对照的目的在于证明和肯定阳性结果的特异性，主要针对第一抗体进行，常用的对照有阳性对照和阴性对照。（二）阳性结果阳性细胞的显色分布有三种类型：①细胞质；②细胞核；③细胞膜表面...
