临床医学检验技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》第十二章固相膜免疫测定第一节概述第二节免疫金标记技术第三节膜载体免疫测定的种类与原理第一节概述固相膜的特点在于其多孔性、非共价键高度吸附抗体或抗原和易于漂洗等，固相膜像滤纸一样，可被液体穿过流出，液体也可以通过毛细管作用在膜上向前移行。标志物可用酶或各种有色微粒子，如彩色胶乳、胶体金或胶体硒。一、常用的固相膜固相膜免疫测定中常用的膜为玻璃纤维素（fiberglass）膜、尼龙（nylon）膜、聚偏氟乙烯（PVDF）膜和硝酸纤维素（NC）膜等。其中最常用为NC膜。二、固相膜的技术要求1.孔径2.流速3.蛋白质结合力4.均一性第二节免疫金标记技术免疫金标记技术主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标志物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测。一、胶体金的制备（一）制备原理胶体金的制备一般采用还原法，常用的还原剂有枸橼酸钠、鞣酸、维生素C、白磷、硼氢化钠等。（二）技术要点枸橼酸三钠还原法制备金溶胶，如此制备的金溶胶其可见光区最高吸收峰在535nm。金溶胶的光散射性与溶胶颗粒的大小密切相关，一旦颗粒大小发生变化，光散射也随之发生变异，产生肉眼可见的显著的颜色变化。（三）注意事项1.玻璃容器的清洁玻璃表面少量的污染会干扰胶体金颗粒的生成，一切玻璃容器应绝对清洁，用前经过强酸洗，后硅化。2.试剂、水质和环境氯金酸极易吸潮，对金属有强烈的腐蚀性，不能使用金属药匙，避免接触天平称盘。其1%水溶液在4℃可稳定数月不变，实验用水一般用双蒸馏水，实验室中的尘粒要尽量减少，否则实验的结果将缺乏重复性。第1页临床医学检验技师考试辅导《临床免疫学和免疫检验》二、免疫金的制备（一）制备原理免疫金是指胶体金与抗原或抗体等大分子物质的结合物，在免疫组织化学技术中，习惯上称之为金探针。制备原理为蛋白质被吸附到胶体金颗粒表面而结合的过程。（二）技术要点1.胶体金溶液的pH2.蛋白质最适标记量（三）注意事项多种蛋白质、葡聚糖、PEG2000、明胶等均为良好的高分子稳定剂，PEG和BSA是最常用的稳定剂。第三节膜载体免疫测定的种类与原理一、免疫渗滤试验免疫渗滤试验（IFA）用于检测各种传染病的抗体和肿瘤标志物等。用于检测尿液HCG的“金标”早孕诊断试剂也已广泛应用。（一）原理斑点金免疫渗滤试验（DIGFA）是将抗原或抗体点加在固相载体...
