ICS65.020.30B44中国实验动物学会团体标准T/CALAS95—2020实验动物肝螺杆菌环介导等温扩增（LAMP）检测方法Laboratoryanimal-DetectionofHelicobacterhepaticusbyloop-mediatedisothermalamplification2020-12-01发布2021-01-01实施中国实验动物学会发布全国团体标准信息平台前言本文件按照GB/T1.1—2020给出的规则起草。本文件附录A为资料性附录。本文件由中国实验动物学会归口。本文件由全国实验动物标准化技术委员会（SAC/TC281）技术审查。本文件由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出并组织起草。本文件起草单位：上海实验动物研究中心、扬州大学。本文件主要起草人：冯洁、张泉、谢建芸、高诚、朱立麒、钱淼。全国团体标准信息平台实验动物肝螺杆菌环介导等温扩增（LAMP）检测方法1范围本文件规定了实验动物肝螺杆菌LAMP检测方法。本文件适用于实验动物肝螺杆菌的检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。凡是注明日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB19489《实验室生物安全通用要求》GB/T19495.2《转基因产品检测实验室技术要求》3术语、定义和缩略语下列术语、定义和缩略语适用于本文件。3.1环介导等温扩增loop-mediatedisothermalamplification，LAMP一种新型核酸扩增方法。针对靶基因上的6个区域设计2对特异引物，在链置换DNA聚合酶（BstDNApolymerase）的作用下，以特异性引物为延伸起点，于60℃～65℃恒温扩增。可在15min～60min内实现109～1010倍的核酸扩增，扩增产物由一系列复杂的大小不等的DNA混合而成。3.2缩略语DNA脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）LAMP环介导等温扩增（loop-mediatedisothermalamplification）PBS磷酸盐缓冲液（phosphatebufferedsaline）flaB鞭毛蛋白B（flagellinB）基因4基本原理采用合适的方法提取检测样本中的细菌DNA。根据肝螺杆菌属flaB基因序列保守区域设计一组LAMP引物，包括外引物F3和B3、内引物FIP和BIP以及环引物LB，对DNA模板进行扩增，根据LAMP扩增结果判定样品中是否含有肝螺杆菌。设计的LAMP扩增引物包括外引物F3和B3、内引物FIP和BIP以及环引物LB，全国团体标准信息平台第三篇实验动物检测方法系列标准132可特异性识别靶序列上的6个区域，利用BstDNA聚合酶（BstDNApolymerase）启动循环链置换反应，在flaB基因序列启动互补链合成，在同一链上...
