ICS65.020.30B44中国实验动物学会团体标准T/CALAS89—2020实验动物鼠痘病毒环介导等温扩增（LAMP）检测方法Laboratoryanimal-Detectionofectromeliavirusbyloop-mediatedisothermalamplificationassay2021-01-012020-12-01发布实施中国实验动物学会发布全国团体标准信息平台前言本文件按照GB/T1.1—2020给出的规则起草。本文件由中国实验动物学会归口。本文件由全国实验动物标准化技术委员会（SAC/TC281）技术审查。本文件由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出并组织起草。本文件起草单位：上海实验动物研究中心、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。本文件主要起草人：周洁、于海波、李昌文、陶凌云、陈洪岩。全国团体标准信息平台实验动物鼠痘病毒环介导等温扩增（LAMP）检测方法1范围本文件规定了实验动物鼠痘病毒（ectromeliavirus，Ect）LAMP检测的原理、方法和结果判定。本文件适用于实验小鼠鼠痘病毒的检测。2规范性引用文件本文件无规范性引用文件。3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1环介导等温扩增法loop-mediatedisothermalamplification，LAMP环介导等温扩增法是利用4～6条特异性引物在具有链置换活性的BstDNA聚合酶的作用下，恒温条件下1h内完成核酸扩增反应的一种特异、高效、可视化的链取代核酸扩增技术。4基本原理DNA在65℃左右处于动态平衡状态，利用可以产生环状结构的引物和BstDNA聚合酶链置换合成的活性，在靶序列两端引物结合处循环不断地产生环状单链结构。任何一个引物向双链DNA的互补部位进行碱基配对延伸时，另一条链就会解离变成单链，引物在恒温条件下引发新链的合成，达到高效扩增靶基因的目的。最后通过核酸扩增过程中产生焦磷酸镁沉淀与荧光染料结合产生的绿色荧光判定阳性结果。5主要试剂和器材5.1试剂a）病毒基因组DNA提取试剂盒。b）核糖核酸环介导等温扩增试剂盒。c）环介导等温扩增荧光目视检测试剂盒。5.2器材a）水浴锅。全国团体标准信息平台111实验动物鼠痘病毒环介导等温扩增（LAMP）检测方法b）环介导等温扩增反应管。c）生物安全柜。d）组织匀浆机。6检测方法6.1空白对照去离子水。6.2阴性对照不含鼠痘病毒的样本DNA。6.3阳性对照鼠疫病毒DNA。6.4引物F3：5′-CTAATACAAAATGTGACAAGTGC-3′B3：5′-CTGCAACCGTTTGATCCT-3′FIP：5′-TTGCCTCGACAACTTAGACACGCCAGATGACACCTTTACATCC-3′BIP：5′-ATCGTGTAGTAACACACAGGACATCAAATTCGCAGTAGTATCCG-3′LP：5′-TGGCTACTCATCTAAAGGAGATGT-3′6.5...
