中华人民共和国国家标准GB5413.19—2010中华人民共和国卫生部发布2010-03-26发布2010-06-01实施食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测定NationalfoodsafetystandardDeterminationoffreebiotininfoodsforinfantsandyoungchildren,milkandmilkproductsGB5413.19—2010I前言本标准代替GB/T5413.19-1997《婴幼儿配方食品和乳粉游离生物素的测定》。本标准附录A为规范性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB5413-1985、GB/T5413.19-1997。GB5413.19—20101食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测定1范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测定。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。3原理利用植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）对游离生物素的特异性和灵敏性，定量测定出试样中待测物质的含量。在含有除待测物质以外所有营养成分的培养基中，微生物的生长与待测物质含量呈线性关系，根据透光率与标准工作曲线进行比较，即可计算出试样中待测物质的含量。4试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。4.1菌株：植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum），ATCC8014。4.2生物素（d-Biotin或VitaminH）标准品（C10H16N2O3S）：纯度≥99%。4.3培养基4.3.1乳酸杆菌琼脂培养基：见附录A。4.3.2乳酸杆菌肉汤培养基：见附录A。4.3.3生物素测定用培养基：见附录A。注：一些商品化合成培养基效果良好，商品化合成培养基按标签说明进行配制。4.4乙醇溶液（50%）。4.5硫酸溶液（3%）：量取3mL硫酸加入到水中，定容至100mL。4.6氢氧化钠溶液（0.5mol/L）：称取20g氢氧化钠溶于1000mL水中。4.7氯化钠溶液（9g/L）：称取9.0g氯化钠溶解于1000mL水中，分装试管，每管10mL。121℃灭菌15min。4.8标准溶液的制备4.8.1生物素标准贮备液（100μg/mL）：称取生物素标准品（4.2）用乙醇溶液（4.4）定容至生物素浓度为100μg/mL，贮于冰箱中。4.8.2生物素标准中间液（1μg/mL）：吸取1mL生物素标准贮备液（4.8.1），用乙醇溶液（4.4）定容至100mL。4.8.3生物素标准工作液（10ng/mL）：吸取1mL生物素标准中间液（4.8.2），用乙醇溶液（4.4）定容至100mL。4.8.4标准曲线工作液GB54...
