SNT 5167-2019 出口动物源食品中氢氯噻嗪等10种利尿剂残留量的测定 液相色谱-质谱质谱法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 51672019出口动物源食品中氢氯噻嗪等 10 种 利尿剂残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法Determination of 10 diuretic residues including hydrochlorothiazide et al in animal-origin foodstuffs for export LC-MS/MS method2019-10-25 发布2020-05-01 实施中 华 人 民 共 和 国 海 关 总 署发 布ICS 67.050C 53ISN/T 51672019前 言本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国武汉海关、湖北省食品质量安全监督检验研究院。本标准主要起草人：赵晓亚、范志勇、叶诚、王鹏、尚吟竹、王晗、罗静、王振华、付晓芳、李晶。1SN/T 51672019出口动物源食品中氢氯噻嗪等 10 种利尿剂残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法1 范围本标准规定了出口动物源食品中氢氯噻嗪、氯噻嗪、氨苯喋啶、丙磺舒、氯噻酮、乙酰唑胺、呋塞米、精磺胺、螺内酯、坎利酮残留量的液相色谱-质谱/质谱的测定方法。本标准适用于猪肉、牛肉、羊肉、牛奶和鸡蛋中氢氯噻嗪、氯噻嗪、氨苯喋啶、丙磺舒、氯噻酮、乙酰唑胺、呋塞米、精磺胺、螺内酯、坎利酮残留量的测定，其他食品也可参照使用。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 方法提要试样经均质处理后，称取适量加入磷酸二氢钾，用乙腈提取，经分散固相萃取方法净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。4 试剂和材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。4.1甲酸（HCOOH，CAS 号：64-18-6）。4.2甲醇（CH3OH，CAS 号：67-56-1）：色谱纯。4.3乙腈（CH3CN，CAS 号：75-05-8）：色谱纯。4.4磷酸二氢钾（KH2PO4，CAS 号：7778-77-0）。4.5无水硫酸镁（MgSO4，CAS 号：7487-88-9）。4.60.1%甲酸甲醇溶液：准确移取 1.0 mL 甲酸（4.1），用甲醇（4.2）定容至 1 000 mL。4.7水-0.1%甲酸甲醇溶液（70：30，v/v）：移取 30 mL 0.1%甲酸甲醇溶液（4.6）和 70 mL 水，混匀。4.8标准物质：坎利酮、螺内酯、氢氯噻嗪、氯噻嗪、乙酰唑胺、呋塞米、精磺胺、丙磺舒、氨苯喋啶和氯噻酮标准物质的纯度均 98%，标准物质的化合物信息参见附录 A。4.9标准储备液：称取适量标准物质（4.8）（精确至 0.000 01 g），分别用甲醇（4.2）溶解，配制成浓度为 0.5 mg/mL 标准储备液，于-18 以下保存，有效期 3 个月。4.10混合标准中间液：用甲醇（4.2）将各标准储备液混合，稀释成氢氯噻嗪、氯噻嗪、氨苯喋啶、丙磺舒、氯噻酮的1.0 g/mL混合标准中间液和乙酰唑胺、呋塞米、精磺胺、螺内酯、坎利酮的1.0 g/mL的混合标准中间液，于 0 4 保存，有效期 1 个月。4.11基质混合标准工作液：准确吸取一定量的混合标准中间液（4.10），用空白基质溶液逐级稀释成氢氯噻嗪、氯噻嗪、氨苯喋啶、丙磺舒、氯噻酮浓度为 5.0 g/L、10.0 g/L、20.0 g/L、50.0 g/L、2SN/T 51672019100.0 g/L和乙酰唑胺、呋塞米、精磺胺、螺内酯、坎利酮浓度为10.0 g/L、20.0 g/L、50.0 g/L、100.0 g/L、200.0 g/L 的基质混合标准工作液，现用现配。4.12乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）：40 m60 m。4.13十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：40 m60 m。4.14石墨化碳黑（GCB）：40 m120 m。4.15微孔滤膜：有机系，0.22 m。5仪器与设备5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。5.2组织捣碎机。5.3振荡器。5.4涡旋混合器。5.5分析天平：感量为 0.000 01 g 和 0.01 g。5.6冷冻离心机：10 000 r/min。5.7氮气吹干仪。6试样制备与保存6.1试样制备6.1.1猪肉、牛肉、羊肉猪肉、牛肉、羊肉各约 500 g，放入组织捣碎机均质，充分混匀，均分成 2 份，分别装入清洁容器内，并标明标记。6.1.2鸡蛋取 16 枚新鲜鸡蛋（约 1 kg），洗净、去壳后充分混匀，均分成 2 份，分别装入清洁容器内，并标明标记。6.1.3牛奶将牛奶从冰箱中取出，放置至室温、摇匀，备用。制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6.2试样保存猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋试样于-20 以下条件下保存；牛奶试样置于 0 4 条件下保存。7测定步骤7.1提取称取约 2 g 试样（精确至 0.01 g）置于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 乙腈（4.3）和 2 g 磷酸二氢钾（4.4），振荡提取 30 min 后，于 0 以 9 000 r/min 的转速离心 5 min，取出上清液，再加入 10 mL乙腈（4.3）重复提取 1 次，离心后合并上清液于 50 mL 离心管中，待净化。3SN/T 516720197.2净化在 7.1 中的待净化上清液中加入 150 mg 无水硫酸镁（4.5）、50 mg PSA（4.12）、50 mg C18（4.13）、7.5 mg GCB（4.14），涡旋混合 30 s 后，于 0 以 9 000 r/min 离心 5 min，取全部上清液，于 45 下用氮气吹至近干，准确加入 2.0 mL 水-0.1%甲酸甲醇溶液（4.7）溶解残渣，过 0.22 m 微孔滤膜（4.15），供液相色谱-质谱/质谱仪测定。7.3空白基质提取液取经测定不含被测组分的试样按 7.1 和 7.2 操作，获得空白基质提取液。7.4测定7.4.1液相色谱条件7.4.1.1 色谱柱：C18色谱柱，150 mm2.1 mm（内径），粒径 3.5 m 或性能相当者。7.4.1.2 柱温：30。7.4.1.3 流动相：A 为水，B 为 0.1%甲酸甲醇溶液（4.6），梯度洗脱，洗脱程序见表 1。表 1 液相色谱的梯度洗脱程序时间/min流动相 A/%流动相 B/%0.0090101.0090103.535651139711.590101590107.4.1.4 流速：0.3 mL/min。7.4.1.5 进样量：5 L。7.4.2正离子扫描模式质谱条件7.4.2.1 离子源：电喷雾离子源（ESI）。7.4.2.2 扫描方式：正离子扫描。7.4.2.3 检测方式：多反应监测（MRM）。7.4.2.4 雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气及其他适合气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去簇电压、碰撞气能量等参数值应优化至最佳灵敏度，参考质谱参数参见附录 B。7.4.3负离子扫描模式质谱条件7.4.3.1 离子源：电喷雾离子源（ESI）。7.4.3.2 扫描方式：负离子扫描。4SN/T 516720197.4.3.3 检测方式：多反应监测（MRM）。7.4.3.4 雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他适合气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去簇电压、碰撞气能量等参数值应优化至最佳灵敏度，其他参考质谱参数参见附录 B。7.4.4液相色谱-质谱/质谱测定7.4.4.1 定性测定按照液相色谱-质谱/质谱条件测定试样和基质混合标准工作液，试样中目标化合物的保留时间与基质混合标准工作液中对应化合物的保留时间偏差在 2.5%之内；定性离子对的相对丰度与浓度相当的基质混合标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表 2 的规定，且每个离子的信噪比均 3，则可判断试样中存在相应的被测物。表 2 定性离子对相对丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%502050（含）1020（含）10允许的相对偏差/%202530507.4.4.2 定量测定将基质混合标准工作液和试样溶液依次注入液相色谱-质谱/质谱仪中，测得定量离子峰面积。待测样液中利尿剂的响应值均应在仪器检测的定量线性响应范围内。在上述仪器条件下，10 种利尿剂的提取离子色谱图参见附录 C。7.5空白试验除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。8结果计算和表述采用基质匹配标准工作曲线定量，试样中被测物的含量由液相色谱-质谱/质谱仪的数据处理软件或按式（1）计算，计算结果应扣除空白值。（1）式中：Xi试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（g/kg）；ci由基质匹配标准工作曲线得到的样液中待测组分的浓度，单位为微克每升（g/L）；V试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；m最终定容体积试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。注：结果保留 3 位有效数字。5SN/T 516720199检出限、定量限和回收率9.1检出限和定量限猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋、牛奶中氢氯噻嗪、氯噻嗪、氨苯喋啶、丙磺舒、氯噻酮的检出限为2.00 g/kg，定量限为 5.00 g/kg；乙酰唑胺、呋塞米、精磺胺、螺内酯、坎利酮的检出限为 5.00 g/kg，定量限为 10.0 g/kg。9.2回收率猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋、牛奶中 10 种利尿剂的添加水平和回收率数据参见附录 D。6SN/T 51672019附 录 A（资料性附录）10 种利尿剂的化合物信息表 A.1 10 种利尿剂的化合物信息化合物英文名称CAS 号化学式相对分子质量氢氯噻嗪hydrochlorothiazide58-93-5C7H8ClN3O4S2297.74氯噻嗪chlorothiazide58-94-6C7H6ClN3O4S2295.72氨苯喋啶triamterene396-01-0C12H11N7253.26丙磺舒probenecid57-66-9C13H19NO4S285.36氯噻酮chlorthalidone66258-76-2C23H29N5O8S535.57乙酰唑胺acetazolamide59-66-5C4H6N4O3S2222.25呋塞米furosemide54-31-9C12H11ClN2O5S330.74精磺胺4-amino-6-chlorobenzene-1,3-disulfonamide121-30-2C6H8ClN3O4S2285.73螺内酯spironolactone52-01-7C24H32O4S416.57坎利酮canrenone976-71-6C22H28O3340.467SN/T 51672019附 录 B（资料性附录）a质谱参考参数1）B.1 正离子扫描模式参考质谱条件B.1.1 电喷雾电压（IS）：5 000 V。B.1.2 气帘气压力（CUR，kPa）：241（氮气）。B.1.3 雾化气压力（GS1，kPa）：414（氮气）。B.1.4 辅助气压力（GS2，kPa）：355（氮气）。B.1.5 碰撞电压（CE）、去簇电压（DP）见表 B.1。B.2 负离子扫描模式参考质谱条件B.2.1 电喷雾电压（IS）：-4 500 V。B.2.2 气帘气压力（CUR，kPa）：241（氮气）。B.2.3 雾化气压力（GS1，kPa）：414（氮气）。B.2.4 辅助气压力（GS2，kPa）：355（氮气）。B.2.5 碰撞电压（CE）、去簇电压（DP）见表 B.1。B.3 10 种利尿剂的主要参考质谱参数详见表 B.1。1）非商业性声明：本标准中所列参数是在 AB SCIEX 5500 质谱仪完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号仪器。表 B.1 10 种利