‘ICs67100X04中华人民共和国国家标准GB/T22287—2008贝类中甲型肝炎病毒检测方法普通RT—PCR方法和实时荧光RT—PCR方法Detectionofhepatitisavirusinshellfish-ContentionalRT-I'CRandreal-timefluorescenceRT-PCR2008-08-12发布200⒏12-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会o"EE"'HEMfi发布GB/T22287-2008日刂吕本标准的附录Λ为规范性附录.本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口.本标准起草单位:中华人民共fn国北京出人境检验检疫局、中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。本标准上要起莘人:陈广全、饶红、段洪安、冯骞、付溥膊、张惠媛、汪琦、曾静、张睿、李金华.CB/Γ22287-2008贝类中甲型肝炎病毒检测方法普通RT—PCR方法和实时荧光RT-PCR方法I范围本标准规定了贝类中甲型肝炎病毒的普通RTPCR和荧光RTPCR检测方法.本标准适用于贝类中甲型肝炎病蓐核酸的检测。2规范性引用文件卜列文件中的条款通过本钚准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的扌l丿lJ文作,其随后所礻f的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准、然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否nr使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引川文件,其最新版本适用于本标准.GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GlJ/T66822008,IS03696:1987,M()D)GI;l阢89实验窀生物安全遁丿丨:耍求SN/T1193萎囚分析检测实验室技术要求3术语和定义阝列术语和定义适川于本标准。31聚合酶链式反应polymerascchaInrcaction,PCRDNΛ模板先经高温变性为单链,在适宜的温度卜和缓冲液中,两条引物分别与模板DNΛ两条链L的一段IL补序列发FL迟火,接着在I)NΛ聚合酶的催化下以四种dN'ΓP为底物,使,Il火引物得以延仲,如此反笈变性、迟火和延仲,使位于两段引物序列之问的DNΛ片段呈几何倍数扩增.32反转录-聚合酶链式反应Ieversetranscriptionpol,merascchaIIlrcaC1it,n,R1-I’CRRNΛ在逆转录酶的作用下,适宜反应条件下,被逆转隶成cI)NΛ,以cDNΛ作为模板进行PCR。33实时荧光R1′—PCRrea⒈“mefIuorescenceRT—PCR实时荧光RTPCR方法是在常规RTPCR的基础上,加人一条特异性的荧光探针.该探针为一段寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,T〃q酶的5’3’夕卜切酶活性将探针酶切降解,便报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可以接收到荧光信号,即每扩增-条DNΛ链...
