中华人民共和国国家标准GB4789.13—2012食品安全国家标准食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验中华人民共和国卫生部发布2012-05-17发布2012-07-17实施GB4789.13—2012I前言本标准代替GB/T4789.13—2003《食品卫生微生物学检验产气荚膜梭菌检验》。本标准与GB/T4789.13—2003相比，主要变化如下：——修改了标准的中文名称；——修改了样品制备过程；——修改了培养基与试剂；——修改了操作步骤；——修改了菌数计算部分；——增加了附录A。GB4789.13—20121食品安全国家标准食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验1范围本标准规定了食品中产气荚膜梭菌（Clostridiumperfringens）的检验方法。本标准适用于食品中产气荚膜梭菌的检验。2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a）恒温培养箱：36℃±1℃；b）冰箱：2℃～5℃；c）恒温水浴箱：50℃±1℃，46℃±0.5℃；d）天平：感量0.1g；e）均质器；f）显微镜：10×～100×；g）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；h）无菌试管：18mm×180mm；i）无菌培养皿：直径90mm；j）pH计或pH比色管或精密pH试纸；k）厌氧培养装置。3培养基和试剂3.1胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸（TSC）琼脂：见附录A中A.1。3.2液体硫乙醇酸盐培养基（FTG）：见附录A中A.2。3.3缓冲动力-硝酸盐培养基：见附录A中A.3。3.4乳糖-明胶培养基：见附录A中A.4。3.5含铁牛乳培养基：见附录A中A.5。3.60.1%蛋白胨水：见附录A中A.6。3.7革兰氏染色液：见附录A中A.7。3.8硝酸盐还原试剂：见附录A中A.8。3.9缓冲甘油-氯化钠溶液：见附录A中A.9。4检验程序GB4789.13—20122产气荚膜梭菌检验程序见图1。图1产气荚膜梭菌检验程序5操作步骤5.1样品制备5.1.1样品采集后应尽快检验，若不能及时检验，可在2℃～5℃保存；如8h内不能进行检验，应以无菌操作称取25g（mL）样品加入等量缓冲甘油-氯化钠溶液（液体样品应加双料），并尽快至于-60℃低温冰箱中冷冻保存或加干冰保存。5.1.2以无菌操作称取25g（mL）样品放入含有225mL0.1%蛋白胨水（如为5.1.1中冷冻保存样品，室温解冻后，加入200mL0.1%蛋白胨水）的均质袋中，在拍击式均质器上连续均质1min～2min；或置于盛有225mL0.1%蛋白胨水的均质杯中，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，作为1:10稀释液。5.1.3以上述1:10稀释液按1mL加0.1%蛋白胨水9mL制备10-2～10-6的系列稀释液。检样25g(mL)检样+225mL0.1%蛋白胨水均质、稀释10-1～10-6稀释...
