中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验4789.13一94GB储产气英膜梭菌检验GB4789.13一84MicrobiologicalexaminationoffoodhygieneExaminationofClostridiumperfringeus1主题内容与适用范围本标准规定了产气英膜梭菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中产气英膜梭菌的检验。2引用标准GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3.1均质器。3.2显微镜。3.3温箱:36士1C。3.4水浴。I5厌氧培养装置:常温催化除氧式或碱性焦性没石子酸除氧式。3.6吸管:1mL,10mLe3.了试管。3.8平皿。3.9接种环或接种针。4培养墓和试荆:.;厄肉培养基:GB4789.28中4.67.亚硫酸盐一多粘菌素一磺胺啼吮琼脂(SPS):GB4789.28中4.69,液体硫乙醇酸盐培养基(FT):GB4789.28中4.70,动力一硝酸盐培养基:GB4789.28中4.72,含铁牛奶培养基:GB4789.28中4.71,卵黄琼脂培养基:GB4789.28中4.68,0.1%蛋白陈水稀释剂:GB4789.28中4.86,硝酸盐还原试剂:GB4789.28中3.17,革兰氏染色液:GB4789.28中2.2.月..弓‘几J月弓亡J‘U﹃1…奋..-月﹃月q月马月q月q月q‘口.中华人民共和国卫生部1994一03一18批准1994一09一01实施GB4789.13一45检验程序产气英膜梭菌检验程序如下:检样25g(.L)检祥+225.L0.1%蛋白膝水稀释剂均质、离心、稀释lo-,稀释液+SPS琼脂很合倾注lo-,稀释液+SPS琼脂混合倾注10稀释液+SPS琼脂混合倾注lo-,稀释液+SPS琼脂混合倾注10一猫释液+SPS琼脂棍合倾注厌氧培养,36士1C,24h,黑色菌落计数任挑黑色菌落10个，分别接种FT培养基确证试验债检形态硝酸盆还原牛奶发醉卵碑脂分解菌数计算6操作步驻6.1活菌计数培养6.1.1按无菌操作称取食品检样25g(mL)放入均质器，加0.1%蛋白陈水稀释剂225ml，低速搅动1^-2min，使之均质化，作为1:10稀释液。6.1.2以上述1:10稀释的均质液按1mL加0.1%蛋白陈稀释剂9mL做成10-1^-10一的系列稀释液。6.1.3吸取各稀释液1mL分别放人2个灭菌平皿内。每个平皿浇注约50℃的SPS琼脂1520m1，仔细转动平皿，使稀释液和琼脂充分混匀。6.1.4上述琼脂平板凝固后，倒置于厌氧培养装置内，于36士1℃培养24h,208GB4789.13一946.1.5选取长有30^-300个黑色菌落的平板，计数黑色菌落数。6.2确证试验6.2.1由平板上任取10个黑色菌落，分别按种FT培养基，于36士1℃培养18^-24h,6.2.2用上述培养液徐片，革兰氏染色镜检。产气荚膜梭菌为革兰氏阳性粗大杆菌，其耐热株可能形成卵形芽抱，位于菌体中央或近端，其宽度一般不大于菌体。6.2.3用接种环(针)穿刺接种...
