中华人民共和国国家标准犌犅１５１９３．２３—２０１４食品安全国家标准体外哺乳类细胞染色体畸变试验（报批稿）２０１４１２０１发布２０１５０５０１实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布食品安全国家标准体外哺乳类细胞染色体畸变试验１范围本标准规定了体外哺乳类细胞染色体畸变试验的基本试验方法和技术要求。本标准适用于评价受试物的体外哺乳类细胞染色体畸变。２术语和定义２．１染色体结构畸变通过显微镜可以直接观察到的发生在细胞有丝分裂中期的染色体结构变化。如染色体中间缺失和断片、染色体互换等。染色体结构畸变可分为染色体型畸变（ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｔｙｐｅａｂｅｒｒａｔｉｏｎ）和染色单体型畸变（ｃｈｒｏｍａｔｉｄｔｙｐｅａｂｅｒｒａｔｉｏｎ）。２．１．１染色体型畸变染色体结构损伤，表现为在两个染色单体的相同位点均出现断裂或断裂重组等改变。２．１．２染色单体型畸变染色体结构损伤，表现为染色单体断裂或染色单体断裂重组等改变。２．２有丝分裂指数中期相细胞数与所观察的细胞总数之比值；是反映细胞增殖程度的指标。２．３核内复制在ＤＮＡ复制的Ｓ期之后，细胞核未进行有丝分裂就开始了另一个Ｓ期的过程。其结果是染色体有４、８、１６…倍的染色单体。２．４裂隙染色体或染色单体损伤的长度小于一个染色单体的宽度，为染色单体的最小错误排列。３试验目的和原理通过检测受试物是否诱发体外培养的哺乳类细胞染色体畸变，评价受试物致突变的可能性。在加入或不加入代谢活化系统的条件下，使培养的哺乳类细胞暴露于受试物中。用中期分裂相阻断剂（如秋水仙素或秋水仙胺）处理，使细胞停止在中期分裂相，随后收获细胞、制片、染色、分析染色体畸变。４仪器和试剂４．１仪器细胞培养箱，倒置显微镜，超净台，离心机。１犌犅１５１９３．２３—２０１４４．２培养液常用Ｅａｇｌｅ’ｓＭＥＭ培养液（ｍｉｎｉｍｕｍｅｓｓｅｎｔｉａｌｍｅｄｉｕｍ，ＭＥＭ），也可选用其他合适培养液。加入抗菌素（青霉素按１００ＩＵ／ｍＬ、链霉素１００μｇ／ｍＬ），将灭活的胎牛血清或小牛血清按１０％的比例加入培养液。４．３代谢活化系统４．３．１犛９辅助因子的配制４．３．１．１镁钾溶液氯化镁１．９ｇ和氯化钾６．１５ｇ加蒸馏水溶解至１００ｍＬ。４．３．１．２０．２犿狅犾／犔磷酸盐缓冲液（狆犎７．４）磷酸氢二钠（Ｎａ２ＨＰＯ４，２８．４ｇ／Ｌ）４４０ｍＬ，磷酸二氢钠（Ｎ...
