中华人民共和国国家标准GB4789.34—2012食品安全国家标准食品微生物学检验双歧杆菌的鉴定中华人民共和国卫生部发布2012-05-17发布2012-07-17实施GB4789.34—2012I前言本标准代替GB/T4789.34-2008《食品卫生微生物学检验双歧杆菌检验》。本标准与GB/T4789.34-2008相比，主要变化如下：——修改了标准的中文名称；——修改了培养基和试剂；——删除了果糖-6-磷酸盐磷酸酮酶（F6PPK）测定和双歧杆菌的计数方法。GB4789.34—20121食品安全国家标准食品微生物学检验双歧杆菌的鉴定1范围本标准规定了食品中双歧杆菌（Bifidobacterium）的鉴定方法。本标准适用于食品中双歧杆菌的鉴定。2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a）恒温培养箱：36℃±1℃；b）气相色谱仪配FID检测器；c）冰箱：2℃～5℃；d）天平：感量0.1g；e）无菌试管：18mm×180mm、15mm×100mm；f）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器（200μL～1000μL）及配套吸头；g）无菌锥形瓶：500mL、250mL。3培养基和试剂3.1双歧杆菌培养基：见附录A中的A.1。3.2PYG液体培养基：见附录A中的A.2。3.3甲醇：分析纯。3.4三氯甲烷：分析纯。3.5硫酸：分析纯（体积比）。3.6冰乙酸：分析纯（体积比）。3.7乳酸：分析纯。3.8乙酸标准溶液：吸取分析纯冰乙酸5.7mL，移入100mL容量瓶中，加水至刻度，标定，标定方法见附录B，此溶液浓度约为1mol/L。3.9乙酸标准使用液：将经标定的乙酸标准溶液用水稀释至0.01mol/L。3.10乳酸标准溶液：吸取分析纯乳酸8.4mL，移入100mL容量瓶中，加水至刻度，标定，标定方法见附录B，此溶液浓度约为1mol/L。3.11乳酸标准使用液：将经标定的乳酸标准溶液用水稀释至0.01mol/L。GB4789.34—201224鉴定程序双歧杆菌鉴定程序见图1。图1双歧杆菌鉴定程序5操作步骤5.1样品制备5.1.1样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。5.1.2以无菌操作称取25g（mL）样品，置于装有225mL生理盐水的灭菌锥形瓶内，制成1:10的样品匀液。5.2稀释及涂布培养步骤厌氧，48h36℃±1℃样品25g（mL）+225mL灭菌生理盐水10倍系列稀释革兰氏染色，过氧化氢酶试验报告选择2个～3个适当稀释度，各取0.1mL分别加入到双歧杆菌琼脂平板进行涂布挑取菌落接种于双歧杆菌琼脂平板接种PYG液体培养基生化反应测定乙酸、乳酸厌氧，48h36℃±1℃厌氧，48h36℃±1℃GB4789.34—201235.2.1用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1.0mL，沿管壁缓慢注于...
