中华人民共和国国家标准GB5413.40—2016食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定2016-08-31发布2017-03-01实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布GB5413.40—20161食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定1范围本标准规定了液相色谱法测定游离核苷酸总量的方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中游离核苷酸总量(包括胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、次黄嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、腺嘌呤核苷酸)的测定。2原理试样经过水提取,用沉淀剂沉淀蛋白质后,通过高效液相色谱分离,用紫外检测器外标法测定试样中核苷酸的含量。3试剂与材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水,液相色谱流动相用水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。3.1.2冰乙酸(CH3COOH)。3.1.3四丁基硫酸氢铵[(C4H9)4NHSO4]。3.1.4甲醇(CH3OH)。3.1.5磷酸氢二钾(K2HPO4)。3.1.6磷酸二氢钾(KH2PO4)。3.1.7磷酸(H3PO4)。3.2试剂配制3.2.1乙酸溶液(100mL/L):吸取10mL冰乙酸,加水定容到100mL。3.2.2磷酸氢二钾溶液(0.1mol/L):称取2.28g磷酸氢二钾,用超纯水溶解并定容到100mL。3.2.3磷酸盐缓冲液(1.40mmol/L四丁基硫酸氢铵,0.01mol/L磷酸二氢钾):称取1.360g磷酸二氢钾,加0.4753g四丁基硫酸氢铵,加900mL水溶解,用磷酸氢二钾溶液调pH至3.2,用水定容到1000mL。一周内使用。3.3核苷酸标准品3.3.1胞嘧啶核苷酸(CMP)(C9H14N3O8P):纯度≥99%。3.3.2腺嘌呤核苷酸(AMP)(C10H14N5O7P):纯度≥99%。3.3.3尿嘧啶核苷酸(UMP)(C9H13N2O9P):纯度≥99%。GB5413.40—201623.3.4鸟嘌呤核苷酸(GMP)(C10H14N5O8P):纯度≥99%。3.3.5次黄嘌呤核苷酸(IMP)(C10H13N4O8P):纯度≥99%。3.4标准溶液配制核苷酸标准混合液(应当天配置):分别称取核苷酸标准品CMP、AMP、UMP各10mg、GMP和IMP各5mg(准确至0.1mg),用超纯水溶解转移至同一个100mL容量瓶中,用水定容至100mL。此标准溶液浓度为:CMP、AMP、UMP各100μg/mL;GMP、IMP各50μg/mL。每个组分称取的质量都要校正水分和钠盐含量,以酸型计。4仪器与设备4.1高效液相色谱仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。4.2天平:感量0.1mg。4.3pH计:精度0.01。4.4恒温培养箱:±2℃。5分析步骤5.1试样制备5.1.1样品预处理5.1.1.1含淀粉的试样称取混合均匀的固体试样约5g(精确至0.1mg),于100mL锥形瓶中,加入约0.2g淀粉酶,加入20mL热水(30℃~40℃)充分溶解试样,或称取混合均匀的液体试样约20g(精确至1mg)于100mL锥...
