中华人民共和国国家标准GB5009.259—2016食品安全国家标准食品中生物素的测定2016-08-31发布2017-03-01实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.259—2016Ⅰ前言本标准代替GB5413.19—2010《婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测定》。本标准与GB5413.19—2010相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中生物素的测定”;———修改了标准曲线管和待测液管制备的表述方式;———修改了测定步骤表达方式;———增加了谷薯类、肉类、新鲜果蔬、藻类试样、蛋类、豆类、坚果类、内脏、强化生物素的食品处理过程;———删除了仪器和设备中通用玻璃器皿的描述。GB5009.259—20161食品安全国家标准食品中生物素的测定1范围本标准规定了食品中生物素的测定方法。本标准适用于食品中生物素的测定。2原理生物素是植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)生长所必需的营养素。在生物素测定培养基中,植物乳杆菌的生长与待测试样中生物素含量呈线性关系,根据透光率与标准工作曲线进行比较,即可计算出试样中待测物质的含量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。3.1试剂3.1.1无水乙醇(C2H6O)。3.1.2氢氧化钠(NaOH)。3.1.3盐酸(HCl)。3.1.4柠檬酸盐。3.1.5α-淀粉酶:≥1.5U/mg。3.1.6木瓜蛋白酶:≥5U/mg。3.1.7硫酸(H2SO4)。3.2试剂配制3.2.1乙醇溶液(50%):量取500mL无水乙醇与500mL水混匀。3.2.2氢氧化钠溶液(0.5mol/L):称取20g氢氧化钠,溶于1000mL水中,混匀。3.2.3氯化钠溶液(0.85%):称取8.5g氯化钠,加水溶解并稀释至1000mL,混匀。3.2.4盐酸溶液(1mol/L):吸取83mL盐酸,用水稀释至1000mL,混匀。3.2.5柠檬酸盐缓冲液(pH4.5):称取1.5g柠檬酸至一个100mL带磁力搅拌器的烧杯中,加入约50mL蒸馏水至溶解,再加入12mL的NaOH(1mol/L),调节pH至4.5(用0.1mol/LHCl),将溶液转入100mL容量瓶中,并用蒸馏水定容。该缓冲液可在2℃~8℃储存3d。3.2.6蛋白酶-淀粉酶液:分别称取200mg木瓜蛋白酶和α-淀粉酶,加入20mL水研磨至匀浆,3000r/min离心5min~10min。现用现配。3.2.7硫酸溶液(3%):量取30mL硫酸加入到1000mL水混匀。GB5009.259—201623.3标准品生物素(d-Biotin或VitaminH)标准品(C10H16N2O3S):纯度≥99%。3.4标准溶液配制3.4.1生物素标准储备液(100μg/mL):精确称取100mg生物素标准品,用乙醇溶液(50%)溶解并转移至1000mL容量瓶中,定容至刻度。储存于棕色瓶中,于2℃~4℃冰箱保存12个月。3.4.2生物素标准中间...
