中华人民共和国国家标准GB4789.39—2013食品安全国家标准食品微生物学检验粪大肠菌群计数2013-11-29发布2014-06-01实施GB4789.39—2013I前言本标准代替GB/T4789.39-2008《食品卫生微生物学检验粪大肠菌群计数》。本标准与GB/T4789.39-2008相比，主要修改如下：——修改了标准的中文名称；——修改了操作步骤；——增加了附录B。GB4789.39—20131食品安全国家标准食品微生物学检验粪大肠菌群计数1范围本标准规定了食品中粪大肠菌群计数的方法。本标准适用于各类食品中粪大肠菌群的计数。2术语和定义2.1粪大肠菌群一群在44.5℃培养24h～48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌群来自人和温血动物粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。3技术要求设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a)恒温培养箱：36℃±1℃;b)冰箱：2℃～5℃;c)恒温水浴箱：44.5℃±0.2℃;d)天平：感量0.1g;e)均质器;f)振荡器;g)无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头;h)无菌锥形瓶：容量500mL;i)无菌培养皿：直径90mm;j)pH计或pH比色管或精密pH试纸。4培养基及试剂4.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LaurylSulfateTryptose，LST）肉汤：见附录A中A.1。4.2EC肉汤（E.coliBroth）：见附录A中A.2。4.3无菌生理盐水：见附录A中A.3。4.41mol/LNaOH：见附录A中A.4。4.51mol/LHCl：见附录A中A.5。5检验程序粪大肠菌群检验程序见图1。GB4789.39—20132图1粪大肠菌群MPN计数法检验程序6操作步骤6.1样品的稀释6.1.1固体和半固体样品：称取25g样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，制成1:10样品匀液，或置225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍打式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取样品25mL置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。6.1.3样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节。6.1.4用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入盛有9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。6.1.5根据对样品污染状况的估计，依次...
