第39卷第2期2023年3月病毒学报CHINESEJOURNALOFVIROLOGYVol.39No.2March20236种呼吸道病毒RT⁃RPA检测体系构建与应用徐聪灵1，王静1，耿合员2*，张阳3，杨国平2，陈峰4，刘文干5*（1.连云港海关，连云港222042；2.江苏国际旅行卫生保健中心（南京海关口岸门诊部），南京210019；3.徐州海关，徐州221000；4.南通海关，南通226000；5.安徽安龙基因科技有限公司，合肥230000）摘要：早期快速诊断是防控呼吸道病毒传播的有效手段，研发灵敏、特异、快速的分子检测技术方法是早期防控的前提和保障。本研究建立同时快速检测甲型流感病毒（InfluenzaAvirus，FluA）、副流感病毒1型（Humanparainfluenzavirus1，HPIV‐1）、呼吸道合胞病毒（Respiratorysyncytialvirus，RSV）通用型、人偏肺病毒（Humanmetapneumovirus，HMPV）、人博卡病毒（Humanbocavirus，HBoV）通用型和腺病毒B型（AdenovirustypeB，AdV‐B）6种呼吸道病毒重组酶聚合酶扩增（Recombinasepolymeraseamplification，RPA）检测体系新的技术方法。选择人β‐actin基因外显子区域序列作为内标基因，根据6种病毒特异性基因的保守区设计引物探针，结合商业化的逆转录重组酶聚合酶扩增（Reverstranscriptrecombinasespolymeraseamplification，RT‐RPA）反应试剂，优化体系的引物及探针浓度、温度、反应时间，构建6种病毒的RT‐RPA检测体系。优化后病毒和内标基因的RT‐RPA检测引物和探针终浓度分别为400nmol/L和200nmol/L，最佳反应温度为39℃，最优反应时间为15min。敏感性实验结果表明，本研究建立的RT‐RPA反应体系对6种病毒的敏感性为1.0×104拷贝/mL，其中，对AdV‐B的敏感性高达1.0×103拷贝/mL；特异性试验结果表明，不同病毒间特异性好，无交叉反应；重复性试验结果表明，6种病毒对高浓度（1.0×107拷贝/mL）和低浓度（1.0×104拷贝/mL）标准品检测出峰时间T变异系数小于5%，重复性好；对100例临床标本进行回顾性实验测试，与市售实时荧光PCR检测试剂盒的阳性符合率、阴性符合率和总体符合率均为100%。本研究提示，建立的RT‐RPA检测体系可用于国境口岸对上述6种呼吸道病毒的日常监测与快速检测。关键词：呼吸道病毒；逆转录重组酶聚合酶扩增；快速检测中图分类号：R373.1文献标识码：A文章编号：1000‐8721（2023）02‐0354‐10DOI：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004241呼吸道感染是世界范围内最常见的疾病之一［1］，发病率在居民发病率总体结构中占据主要地位。呼吸道感染绝大多数...
