解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn1细胞凋亡检测实验1.实验原理在凋亡的发生过程中，细胞表现出非常明显的形态学特征。这些形态学特征主要有以下几点：1）细胞丧失了表面结构，形成光滑的轮廓，从周围的正常细胞组织中分离了出来。2）细胞体积变小。在细胞体积变小的过程中，主要的形态学变化有：胞浆内细胞器发生集中分布；细胞膜出芽/起泡（bleb），细胞发生皱缩。但是在细胞体积变小的过程中，细胞胞浆内的细胞器形态始终保持完整性。3）细胞核内染色质结构改变。这是整个过程中形态学上最引人注意的形态变化。染色质的形态学变化主要表现为：a）染色质固缩（condensation）；b）染色质边缘化（margination）；c）细胞核内胞浆紧实（compaction）；d）细胞核的核膜折叠（fold）。4）细胞形成凋亡小体（Apoptoticbody）。在这一阶段，凋亡细胞会裂解为很多由细胞膜包饶的小体。在每一个凋亡小体内都有一簇细胞器。由于细胞器被细胞膜包饶，没有细胞内容物的外泄，因此不会引起周围的炎症反应。5）凋亡细胞/凋亡小体被识别和被吞噬。凋亡小体会被迅速吞噬，形成吞噬体（phagosome），随后这些吞噬体进一步变性，成为溶酶体残留小体（lysosomalresidualbody）。解螺旋http://www.helixlife.cn/2.实验目的检测细胞的凋亡情况1）研究体系中是否有凋亡现象发生，（定性）；2）凋亡的发生率。（相对的概念，很多时候需要结合细胞群体的增殖率来分析），反映细胞群体的生长状态；3）了解细胞凋亡的严重程度以及凋亡的发生阶段。3.实验材料3.1.主要试剂（以westernblot试剂为主，实验室常规试剂略去不计）试剂来源Cat.No.解螺旋陪伴医生科研成长http://www.helixlife.cn2RIPA碧云天P0013CPMSFBio-RadMSB1001PierceBCAProteinAssayKitThermoScientific232254XLeammli加样缓冲液Bio-Rad1610747β巯基乙醇Sigmaaldrich60-24-2ProteinMarker天能180-6003脱脂奶粉生工A600669WesternBlotStrippingBufferThermoScientific21059ECLWesternBlottingSubstrateThermoScientific321063.2.主要仪器仪器名称来源型号离心机ThermoScientificMicro17R恒温金属浴佑宁仪器MiniH-100L酶标仪BioTekEpoch-256600电泳仪上海天能EPS-300凝胶成像系统上海天能Tanon-600流式细胞仪BDe126037显微镜奥林巴斯CX233.3.其他根据实际情况选用合适的检测方法。解螺旋http://www.helixlife.cn/4.实验步骤4.1形态学方法形态学检测主要是通过显微镜，观察细胞甚至是亚细胞层面...
