Western印迹法仪器:灭菌器、低温高速离心机、酶标仪、-80℃低温冰箱、-20℃/4℃冰箱、垂直平板电泳槽、转移电泳槽、伯乐电泳仪、恒温水浴摇床、恒温数控电热箱、多用脱色摇床、热封口器、恒温磁力搅拌器、电子酸度计、振荡器、万用电炉、电子天平(0.01~200、0.0001~200g各一台)。试剂:三羟甲基氨基甲烷(Tris,MW121.14)、盐酸三羟甲基氨基甲烷(TrisHCl,MW157.59,仅用于Stripping配方配制)、浓盐酸、异丙醇、NaH2PO4(MW119.98)、Na2HPO4·12H2O(MW358.14)、十二烷基硫酸钠(SDS,MW288.38)、过硫酸胺(AP)、丙稀酰胺(Acr)、甲叉双丙稀酰胺(Bic)、吐温20(Tween20)、氯化钠(NaCl)、氢氧化钠(NaOH)、氯化钾(KCl)、聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)、95%乙醇、磷酸、牛血清白蛋白(BSA)、N,N,N',N'-四甲基乙二胺(TEMED)、二硫叔糖醇(DTT,MW154.5)、溴酚蓝、甘油(丙三醇)、甘氨酸、冰醋酸、甲醇、丽春红S、三氯乙酸、磺基水杨酸、β-巯基乙醇、NP-40(乙基苯基聚乙二醇)、去氧胆酸钠、BCA蛋白测定试剂盒、显影液、定影液、抗体、ECL化学发光试剂、蛋白marker、钒酸钠(Na3VO4)、氟化钠(NaF)、乙二胺四乙酸(EDTA)、苯甲基磺酰氟(PMSF)、Pepstatin(胃酶抑素)、Leupeptin(亮肽素)、Aprotinin(抑肽酶)试剂配制:(一)母液严禁使用微量加样器吸取盐酸,只能用玻璃滴管1.0mol/LTris·HClTris(MW121.14)30.29g(121.1g)蒸馏水200ml(800ml)溶解后,用浓盐酸调pH至6.8和7.4(在PH计监测下缓慢滴加),最后用蒸馏水定容至250ml(1000ml),4℃保存。1.0mol/LTrisHClTris(MW157.6)7.88g蒸馏水35ml溶解后,用浓盐酸调pH至6.8(在PH计监测下缓慢滴加),最后用蒸馏水定容至50ml,4℃保存。1.5mol/LTris·HCl(pH8.8)Tris(MW121.14)45.43g(181.7g)超纯水200ml(800ml)溶解后,用浓盐酸调pH至8.8,最后用超纯水定容至250ml(1000ml),4℃保存。0.5mol/LTris·HCl(pH6.8)Tris(MW121.14)15.14g(60.57g)超纯水200ml(800ml)溶解后,用浓盐酸调pH至6.8,最后用超纯水定容至250ml(1000ml),4℃保存。1.74mg/ml(10mmol/L)PMSFPMSF0.0522g异丙醇30ml溶解后,分装于1.5ml离心管中,-20℃保存。0.1mol/LEDTAEDTA0.8767g蒸馏水10ml热磁力搅拌器充分搅拌,调pH至8.0定容于30ml分装,-20℃保存。0.5mmol/Lpepstatin(胃酶抑素难溶解)Pepstatin0.005g甲醇14.58ml分装,-20℃保存。避免反复冻融。10mmol/Lleupeptin(亮抑酶肽...