细胞功能实验实验技术分享（EdU、TUNEL染色）目录实验原理01详细步骤02试剂耗材批号03避坑指南04EdU染色实验原理细胞增殖是指细胞在周期调控因子的作用下，通过DNA复制等反应，完成细胞分裂的过程。增殖检测一般是分析分裂中细胞的数量变化，进而反映细胞的生长状态及活性，目前广泛应用于肿瘤生物学，分子生物学，药代动力学等领域。细胞增殖检测的方法众多，应用非常广泛，按检测原理主要分为4类：检测DNA合成、检测代谢活性、检测细胞增殖相关抗原和检测ATP浓度。其中，细胞DNA合成检测是通过测定细胞的DNA合成量来评价细胞的增殖能力，直接测定DNA合成是检测细胞增殖最准确的方法，它是细胞增殖、细胞周期、DNA修复及分化、信号通路和细胞标记物追踪等研究方向常用方法之一，常用的检测试剂主要是EdU、BrdU等。BrdU(Bromo-deoxyuridine)法，是在DNA复制过程中，由BrdU代替胸腺嘧啶核苷结合至DNA链，再通过带有标记的BrdU抗体，与DNA链上的BrdU发生抗原抗体反应，通过检测BrdU上的标记信号判断细胞增殖状态的方法。EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine)，是胸腺嘧啶脱氧核苷类似物，在DNA合成过程中，它可替代胸腺嘧啶脱氧核苷，掺入到新合成的DNA中。EdU上的乙炔基能与荧光标记的小分子叠氮化物探针（如FITCAzide、AF系列染料等），在一价铜离子的催化下，形成稳定的三唑环。该反应非常迅速，因此被称作点击反应（Clickreaction）。通过点击反应，新合成的DNA会被相应的荧光探针所标记，此时，可以使用荧光检测设备，检测细胞增殖状况。相较于BrdU法，EdU法具有明显的优势：由于存在空间位阻，BrdU法的大分子抗体很难与DNA链上的BrdU结合。为了使大分子的BrdU抗体与DNA上的BrdU结合，需要对双链DNA进行变性处理（如酸变性、热变性或者DNase消化等）。这种变性可能会影响细胞形态，并影响后续的细胞染色与检测。而EdU法使用的是小分子叠氮化物，空间位阻小，无需对DNA进行变性处理。EdU法无需使用抗体，操作便捷，检测灵敏度高，目前正逐步取代BrdU法，现已被广泛应用于细胞增殖检测。EdU染色详细步骤1.小鼠脊髓组织冰冻切片EdU染色1.1小鼠脊髓损伤模型建立1.1.1使用1.25%阿佛丁作为麻醉剂，麻醉剂量为0.2ml/10g，麻醉方法采用腹腔注射（千万不要一次打过多麻醉剂，小鼠麻醉需要一个过程）。将手术器械、碘伏、利多卡因、青霉素、纱布、注射器等放入生物安全柜，紫外线消毒30分钟。1.1.2取小鼠称重，计算麻醉剂用量（1.25%阿佛丁，0.2ml/10g，腹腔注射...
