高效液相色谱高效液相色谱法测定扑热息法测定扑热息痛的含量痛的含量吉林大学国家级生物实验教学示范中心1、目的要求2、实验原理3、试剂与器材4、实验步骤5、注意事项6、思考题吉林大学生物基础实验教学中心目的要求目的要求1．掌握用外标法对比法测定药物含量的实验步骤和结果计算方法2．熟悉高效液相色谱仪的使用方法吉林大学生物基础实验教学中心实验原理实验原理扑热息痛即对乙酰氨基酚，其稀碱溶液在257±1nm波长处有最大吸收，可用于定量测定。由于在其生产过程中，有可能引入对氨基酚等中间体，这些杂质也有紫外吸收。如果用分光光度法测定，杂质会对含量测定的准确性造成干扰。因此，可采用具有分离能力的高效液相色谱法将被测物和杂质分离开测定，则杂质对被测物含量测定的干扰即被消除。吉林大学生物基础实验教学中心试剂与器材试剂与器材•高效液相色谱仪•色谱柱：ODS柱（150mmх4.6mm,5um）•流动相：甲醇-水（40：60）流速：1.0ml/min•检测波长：257nm•SGE50ul微量注射器吉林大学生物基础实验教学中心实验步骤实验步骤1、配制对照品溶液2、样品溶液的配制3、进样分析4、记录格式5、结果计算吉林大学生物基础实验教学中心标准品溶液的配制：分别取母液（1mg/ml）5ml，4ml，3ml，2ml，1ml，加入标号5-标号1的100ml容量瓶中，并用去离子水稀释至刻度，摇匀。用注射器吸取标准品1ml，过0.45um滤膜，滤液转移到1.5mlEP管中，分别标记。用微量注射器进样，记录色谱图的峰面积和出峰时间。注意！0.45um滤膜可重复使用，但须反复润洗！吉林大学生物基础实验教学中心•供试品溶液的配制：•精密称取对乙酰氨基酚粉末3mg，60℃水浴40min，放冷10min，待基本溶解完全，置100ml的容量瓶中，加适量去离子水，振摇，加去离子水至刻度，摇匀即得。吉林大学生物基础实验教学中心进样分析：用注射器吸取供试品约1ml，经过0.45um滤膜，滤液转移到1.5mlEP管中。用微量注射器吸取EP管中供试品0.1ml，进样。记录色谱图的峰面积。吉林大学生物基础实验教学中心•供试品浓度的计算•将标1-标5按浓度-峰面积对应关系做标准曲线，将供试品峰面积带入标准曲线求出供试品浓度。吉林大学生物基础实验教学中心注意事项注意事项1．此实验过程中应注意进样量的一致，因此，采用注射过量的样品体积，通过进样环（loop）来定量进样。2．如果出现色谱峰分离不完全的现象，则可以通过调整色谱柱的长度，调整流动相中甲醇和水的比例，以改善分离效果，使杂质峰和样品峰...
