YYSWDB0094蛋白质含量测定紫外光谱280nm光吸收法YY-SW-DB-0094蛋白质-含量测定-紫外光谱-280nm光吸收法1.范围本方法采用紫外吸收法测定蛋白质含量本方法适用于各类蛋白质适用蛋白质浓度范围为为0.1mgmL-11.0mgmL-12.原理2.1蛋白质分子中所含的酪氨酸和色氨酸残基使蛋白质在28Onm下具有最大吸收值这是因为两种氨基酸残基的苯环中含有共轭双键在一定的浓度范围内蛋白质溶液的280nm光吸收值与其浓度成正比因此可用作定量测定但不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量不同所处的微环境也不同因此不同的蛋白质溶液在280nm的光吸收值也不同但区别不十分明显据统计浓度为1mgmL-1的1800种蛋白质溶液在280nm处的光吸收值在0.33.0之间平均为1.250.51紫外吸收法操作简便快捷不消耗样品低浓度的盐类不干扰测定在生化研究中应用广泛尤其是适合于柱层析分离中蛋白质洗脱情况的检测但也有相当的物质对紫外法有干扰如核酸等3.试剂氯化钠4.仪器紫外分光光度计5.试样制备5.1标准蛋白溶液牛血清白蛋白溶液用9mgmL-1的NaCl配制成浓度为1mgmL-1的溶液5.2待测蛋白溶液蛋白质浓度控制在1.5mgmL-12.5mgmL-1范围内6.操作步骤取3mL蛋白质样品以相应的缓冲液作对照选用1cm光径的石英比色杯在280nm测光吸收值7.结果计算7.1通常以蛋白质浓度为1mgmL-1的A2801.0作为根据估算待测液中的蛋白质浓度若已知该蛋白质的文献值可直接计算出待测样品中蛋白质的浓度7.2蛋白质的紫外吸收峰常因pH值的改变而有变化故测定时应注意pH值的控制当然也可以先做一标准曲线再求未知样中的蛋白质浓度本法适用于一般的半定量测定也可用于纯蛋白质的定量测定8.参考文献1.李如亮主编.生物化学实验.武汉武汉大学出版社1998.37-582.张龙翔等主编.生化实验方法和技术.北京:高等教育出版社1997.136-1443.李建武等合编.生物化学实验原理和方法.北京:北京大学出版社1994.150-174
