第一部分微生物的利用实验2分离以尿素为氮源的微生物浙科版选修1从自然界中分离微生物自然环境中微生物的种类和数量要受到所处环境中有机物、氧、温度、水分、pH值、光线等各种因素的影响。土壤中的微生物分布的数量:按种类递减,细菌(108个/g)>放线菌(107个/g)>霉菌(106个/g)>酵母菌(105个/g)>藻类(104个/g)>原生动物(103个/g)。土壤中的大量微生物已成为分离各种抗生素、生理活性物质、酶和氨基酸产生菌的主要来源。目前全世界能分离培养的微生物还不到其总数的1%。从土壤中采集微生物土壤有机质含量和通气状况有机质丰富的土壤如耕土,菜园土,近郊土壤,通气保水性能好,适合细菌,放线菌生长繁殖;森林土植被多,枯叶多,有机质丰富,但阴暗潮湿,适合霉菌,酵母生长繁殖;沙土,无植被的山坡土等有机质含量少的,微生物含量少。土层的纵剖面采土样最好的土层是5—25cm。由于阳光照射,1-5cm的表层土的蒸发量较大、又由于紫外线具有杀菌作用,所以该土层的微生物数量较少;25cm以下的土层因土质紧密,空气、营养、水分缺乏,含菌量逐步减少。土壤采样方法:采土样地点选好后,用小铲子去除5cm表土,取离地面5-15cm处的土样10-25克,盛于预先灭菌的牛皮纸袋中扎紧,并标明时间,地点和环境等情况,以备查考。分离纯化为了获得某一特定的微生物菌种,必须进行微生物的分离纯化,把最需要的菌株直接从样品中分离出来。好氧微生物的分离纯化1、常规的分离方法:划线分离法、稀释涂布法2、平皿反应快速检出法:选用特异的检出方法和筛选方案,可显著提高菌株分离纯化的效率。变色圈法:在平板中加入指示剂或显色剂,使所需微生物能被快速鉴别出来。产生有机酸或胺等碱性物质的微生物,通常采用pH值指示剂可检测出来。原理:根据微生物特殊的生理特性或利用某些代谢产物生化反应来设计特殊的分离培养基,通过观察微生物在选择性培养基上生长状况或生化反应如透明圈、变色圈、抑菌圈等进行分离。尿素NH3中性碱性酚红颜色:黄色紫红色变色范围是pH6.4-8.2细菌产生的脲酶向周围扩散,将培养基中的尿素分解,产生的氨使培养基变碱,于是酚红由黄变红。随着培养时间的延长,红色区域的面积越来越大。细菌(一)制备培养基:全培养基、尿素培养基(二)制备细菌悬液制备成10-2、10-3、10-4、10-5土壤稀释液实验组对照组(三)倒平板需要倒3个LB平板,9个尿素平板LB(对照)尿素10-210-310-4每个稀释度1个LB对照平板3个尿素平板(平行重复组)(四)实验结果1全培养基尿素...