nqi-181c基础研究·412-BME&ClinMed,July2023,Vol.27,No.4生物医学工程与临床2023年7月第27卷第4期网络出版时间：2023-06-28814:14:02D01:10.13339/j.cnki.sglc.20230627.003网络出版地址：https://kns.cnki.net/kcms2/detail/12.1329.R.20230627.0916.006.html骨髓间充质干细胞来源外泌体通过miR-181c对脊髓损伤的修复作用研究许建，郭瑞摘要：目的探索骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的miR-181c对脊髓损伤(SCI)的修复作用。方法用全骨髓贴壁法分离大鼠BMSC，流式细胞术检测CD29、CD90、CD45及CD34表达。根据转染物质的不同分为Control组（未处理）、miR-181c组（转染miR-181cmimc质粒）及miR-NC组（转染miR-NC质粒）。提取外泌体，用透射电子显微镜观察外泌体形态。构建SCI大鼠模型，造模后1h,SCI+外泌体组大鼠尾静脉注射BMSC来源的外泌体;SCI+miR-181c组大鼠尾静脉注射转染miR-181cmimic的BMSC来源的外泌体;SCI+miR-NC组大鼠尾静脉注射转染miR-NC的BMSC来源的外泌体；Sham组、模型组大鼠尾静脉注射等体积的0.9%氯化钠溶液（生理盐水）。处理后第1天、第3天、第7天、第14天及第28天采用行为学评分（BBB）评估大鼠的运动功能,TUNEL染色检测脊髓组织细胞调亡，酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠血清炎性因子肿瘤坏死因子(TNF-α）、白细胞介素1β(IL-1β)表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测脊髓组织、外泌体中miR-181c,脊髓组织中TNF-α、IL-1βmRNA水平，Westernblot检测脊髓组织中Cleaved半胱胺酸蛋白酶第三型（Caspase3)、Caspase3、Bcl关联X蛋白(Bax)及B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl2)蛋白,BMSC、外泌体中CD9、CD63表达水平。结果透射电子显微镜下观察，BMSC来源的外泌体呈类圆形，直径约50～100nm。Control组与miR-NC组外泌体中miR-181c表达水平差异无统计学意义（t=0.297,P>0.05）。与miR-NC组比较,miR-181c组外泌体miR-181c表达水平升高（1.03±0.21vs0.34±0.04)（t=7.813,P<0.05）。与SCI组比较,SCI+外泌体组脊髓组织miR-181c表达水平升高（0.42±0.06vs0.23±0.03）（t=9.500,P<0.05）。与SCI+miR-NC组比较,SCI+miR-181c组脊髓组织miR-181c表达水平升高（0.22±0.03vs1.32±0.13)（t=18.440,P<0.05）。SCI+miR-181c组大鼠BBB评分高于SCI+miR-NC组（t=18.440,P<0.05）。SCI+外泌体组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量和脊髓组织中TNF-α、IL-1β表达水平均低于SCI模型组（P<0.05）,SCI+miR-181c组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量和脊髓组织中TN...
