附件2食品中呕吐毒素的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201702）1范围本方法规定了食品中呕吐毒素的胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于谷物加工品及谷物碾磨加工品中呕吐毒素的快速测定。2原理样品中呕吐毒素与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和与检测卡中检测线（T线）上呕吐毒素-BSA偶联物的免疫反应，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中呕吐毒素进行定性判定。3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。3.1试剂3.1.1提取液：水或胶体金免疫层析检测卡专用提取液。3.1.2甲醇。3.2参考物质呕吐毒素参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥99%。表1呕吐毒素参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量脱氧雪腐镰刀菌烯醇Deoxynivalenol51481-10-8C15H20O6296.32注：或等同可溯源物质。3.3标准溶液配制准确称取适量呕吐毒素参考物质（精确至0.0001g），用甲醇溶解，配成0.10mg/mL的标准储备液，-20℃保存，有效期3个月。3.4材料3.4.1呕吐毒素胶体金免疫层析检测卡。3.4.2中速定性滤纸。3.4.3滤膜：0.45µm水相滤膜。4仪器及设备4.1天平：感量分别为0.01g和0.0001g。4.2粉碎机。4.3样品筛：0.9mm。4.4漩涡混合器：1500rpm/min。4.5移液器：100μL，200μL，1.0mL。4.6恒温装置：37.0±2.0℃℃。4.7环境条件：温度15-30℃，湿度≤80%。5分析步骤5.1试样制备样品粉碎：将待测样品粉碎，过0.9mm样品筛，充分混合均匀，备用。5.2试样提取准确称取粉碎混匀样品5.0g于离心管中，加入25.0mL水或专用提取液（3.1.1），漩涡混合器（4.4）提取5min，静置1min，中速定性滤纸（3.4.2）过滤，滤液用0.45µm水相滤膜（3.4.3）过滤，将滤液稀释至检测卡（3.4.1）检测范围内，混匀，即得待测液。5.3测定步骤吸取150µL上述待测液加入到检测卡中，恒温装置内反应6min后进行结果判定。5.4质控实验每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。5.4.1空白试验称取空白试样，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。5.4.2加标质控试验准确称取空白试样5.0g或适量（精确至0.01g）置于离心管中，加入适量呕吐毒素标准溶液，使呕吐毒素浓度为1.0mg/kg，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。6结果判定要求根据控制线（C线）和检测线（T线）颜色变化进行结果判定，采用目测法对结果进行判定...
