中华人民共和国国家标准鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验GB15193.4一94Salmonellatyphimurium/mammalsmicrosomalenzymetest(Amestest)主题内容与适用范围本标准规定了Ames试验的基本技术要求。本标准适用于检测环境有害物质的致突变作用。2原理鼠伤寒沙门氏菌的突变型(即组氨酸缺陷型)菌株在无组氨酸的培养基上不能生长，在有组氨酸的培养基上可以正常生长。但如在无组氨酸的培养基中有致突变物存在时，则沙门氏菌突变型可回复突变为野生型(表现型)，因而在无组氨酸培养基上也能生长，故可根据菌落形成数量，检查受试物是否为致突变物。某些致突变物需要代谢活化后才能使沙门氏菌突变型产生回复突变，代谢活化系统可以用多氯联笨(PCB)诱导的大鼠肝匀浆(S-9)制备的S-9混合液。3仪器3.1实验室常用设备。3.2低温高速离心机，低温冰箱(-80`C)或液氮罐，洁净工作台，恒温培养箱，恒温水浴，蒸气压力锅，匀浆器等。4培养墓制备及试剂的配制培养基成分或试剂除说明外至少应是化学纯，无诱变性。避免重复高温处理，选择适当保存温度和期限，如肉汤保存于4℃不超过六个月，其他详见下述各培养基及溶液说明。4.1营养肉汤培养基牛肉膏2.5g胰陈(或混合蛋白陈)5.0g氯化钠2.5g磷酸氢二钾(K2HP0,·3H20)1.3g蒸馏水500mL加热溶解，调pH至7.4，分装后。.103MPa20min灭菌，普通冰箱保存备用，保存期不超过半年。4.2营养肉汤琼脂培养基:用作a基因型鉴定的结晶紫敏感试验，抗氨节青霉素和四环素试验，紫外线敏感性试验。b.细菌活力鉴定。琼脂粉1.5g营养肉汤培养基100mL一一，一.-.一一一-一.，一~一目.一，一.-一.--~-一~叫一一一.~一一一~，-中华人民共和国卫生部1994一08一10批准1994一08门0实施Gs15193.4一94加热融化后调pH为7.4,0.103MPa20min灭菌。4.3底层培养基所需试剂及配制方法如下:4.3.1磷酸盐贮备液磷酸氢钠钱(NaNH4HP04·4H20)17.5g柠檬酸(C6Ha07·H20)10.0g磷酸氢二钾(K}HPOO50.0g硫酸镁o(MgS04·7H}O)1.0g加蒸馏水至100mL,O.103MPa20min灭菌。注:1)待其他试剂完全溶解后再将硫酸镁缓慢放入其中继续溶解，否则易析出沉淀。4.3.240%葡萄糖溶液葡萄糖40.0g加蒸馏水至100mL,0.055MPa20min灭菌。4.3.31.5%琼脂培养基琼脂粉6.09蒸馏水400mL融化后0.103MPa20min灭菌。4.3.4底层培养基(无菌操作)趁热(80'C)，在灭菌琼脂培养基中(400mL)依次加人:磷酸盐贮备液8mL40%葡萄糖溶液20mL充分混匀，待凉至80℃左右时倒平皿，每皿.90mm)25mL,37℃培养过夜以除去水分及...
