DBS22吉林省地方标准DBS22/003—2012食品安全地方标准生牛乳中雄激素的测定气相色谱-质谱法2012-12-10发布2013-01-01实施吉林省卫生厅发布DBS22/003—2012I前言本标准的附录A为资料性附录。本标准起草单位：国家农业深加工产品质量监督检验中心、吉林省产品质量监督检验院。本标准起草人：李宁、邴炜、华蕾、李刚、石金娥、刘斌、李媛媛、王庆峰、张庆波、郎乐、李滢倩、刘桂华、鲍懿、赵文荣等。DBS22/003—20121食品安全标准生牛乳中雄激素的测定气相色谱-质谱法1范围本标准规定了生牛乳中睾酮、氟甲睾酮、雄烯二酮、司坦唑醇的气相色谱-质谱方法。本标准适用于生牛乳中睾酮、氟甲睾酮、雄烯二酮、司坦唑醇的测定。本标准方法检出限为：睾酮0.03mg/kg，氟甲睾酮0.1mg/kg，雄烯二酮0.01mg/kg，司坦唑醇0.05mg/kg。2原理试样中雄激素经酶解后用乙酸乙酯提取，冷冻离心脱脂净化，气相色谱-质谱仪检测，外标法定量。3试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。3.1乙酸乙酯。3.2甲醇：色谱纯。3.3氯化钠。3.4β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液：4.5U/mLβ-葡萄糖醛酸酶，14U/mL芳香基硫酸酯酶。3.5乙酸。3.6乙酸钠。3.7乙酸-乙酸钠缓冲溶液：称取43.0g乙酸钠，加入22mL乙酸，用水溶解并定容至1000mL，用乙酸调节pH值到5.2。3.8标准物质：睾酮、氟甲睾酮、雄烯二酮、司坦唑醇，纯度均≥95%。3.9雄激素标准储备液：称取睾酮、氟甲睾酮、雄烯二酮和司坦唑醇标准品（4.8）各50mg（精确到0.1mg），用甲醇（4.2）定容至50mL，配成1.0g/L的雄激素混合标准储备液。3.10雄激素标准使用液：分别吸取雄激素标准储备液（4.9），用乙酸乙酯（4.1）分别稀释并定容，配制成浓度为0.5、1.0、10、20、50mg/L的标准使用液，现用现配。4仪器和设备4.1气相色谱-质谱仪：配有EI源。4.2旋转蒸发仪。4.3涡旋混和器。4.4冷冻离心机。4.5超声波清洗仪。4.6分析天平：感量0.1mg。DBS22/003—201225测定步骤5.1样品的预处理称取试样5g（精确至0.01g）于50mL具塞比色管中，加入10mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液（4.7），涡旋混匀，再加入β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液100μL，于37℃±1℃酶解12h。取出冷却至室温后，加入5-7g氯化钠（4.3），加入20mL乙酸乙酯（4.1）涡旋2min，超声30min，静置分层后将乙酸乙酯转移至50mL容量瓶，残渣再萃取2次，每次加入15mL乙酸乙酯（4.1），涡旋2min，超声30min，合并乙酸乙酯，残渣中再加入适量乙酸乙酯（4.1）涡旋2min...
