DBS江苏省地方标准DBS32/004—2014食品安全地方标准青奥会食品中致病菌快速检测2014-06-30发布2014-06-30实施江苏省卫生和计划生育委员会发布DBS32/004—2014I前言本标准系首次发布。DBS32/004—20141青奥会食品中致病菌快速检测1范围本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157：H7、副溶血性弧菌的病原菌自动检测系统检测方法和实时荧光PCR检测方法，以及志贺氏菌实时荧光PCR检测方法。本标准适用于2014年青奥会食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157：H7、副溶血性弧菌的快速检测。其他大型活动可参考本标准执行。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。第一法病原菌自动检测系统检测3原理病原菌自动检测系统利用多聚酶链反应（PCR）扩增目标细菌DNA特异片段，筛选目标菌是否存在。反应所需的引物、DNA聚合酶和单核苷酸等被合并成为一个稳定、干燥的试剂片，装入PCR反应管中，检测系统运用荧光检测来分析PCR产物。PCR试剂片含有荧光染料，能结合双链DNA，受光激发后能发出荧光信号。在检测过程中，病原菌自动检测系统通过测量荧光信号的变化，分析测量数据，判定阳性或阴性结果。4设备和材料4.1病原菌自动检测系统。4.2恒温空气振荡摇床：36℃±1℃、30℃±1℃。4.3加热槽：37℃±1℃、95℃±1℃。4.4冷却槽。4.5天平：感量0.1g。4.6均质器。4.7冰箱：4℃、-20℃。4.8微量移液器：1μL-10μL、10μL-100μL、100μL-1000μL。DBS32/004—201424.9灭菌吸头：10μL、200μL、1000μL。4.10PCR反应管及支架。4.11pH计或pH试纸。5试剂与培养基5.1水：应符合GB/T6682中一级水的规格，121℃高压灭菌30min。5.2病原菌自动检测系统检测试剂盒（溶菌试剂、试剂片）。5.3培养基5.3.17.5%氯化钠肉汤：见GB4789.10-2010附录A中A.2。5.3.2缓冲蛋白胨水（BPW）：见GB4789.4-2010附录A中A.1。5.3.3亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：见GB4789.4-2010附录A中A.3。5.3.4李氏增菌肉汤LB（LB1，LB2）：见GB4789.30-2010附录A中A.3。5.3.5改良EC肉汤：见GB/T4789.36-2008附录A中A.1。5.3.63％氯化钠碱性蛋白胨水：见GB4789.7-2013附录A中A.1。6操作步骤6.1样品制备和增菌培养6.1.1金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌的样品处理与增菌液...
