DBS22吉林省地方标准DBS22/018—2013食品安全地方标准鲜(冻)畜肉中鸭源性成分的定性检测PCR方法2013-10-08发布2013-10-08实施吉林省卫生厅发布DBS22/018—2013I前言本标准的附录A为资料性附录。本标准主要起草单位：吉林省产品质量监督检验院、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局、吉林农业大学。本标准主要起草人：史艳宇，刘金华，邴炜，华蕾，王莹，金哲勇，张庆波，吕航，赵立群。DBS22/018—20131食品安全地方标准鲜(冻)畜肉中鸭源性成分的定性检测PCR方法1范围本方法规定了鲜（冻）畜肉中鸭源性成分的PCR定性分析方法。本方法适用于生鲜、冷冻畜肉中鸭源性成分定性检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义鸭源性成分duck-derivedmaterials鸭种属特异性DNA片段。4原理对样品进行DNA提取，通过PCR扩增，检测鸭特异性基因片段。5试剂和材料除特别说明以外，所有试剂均为分析纯，水为按照GB/T6682规定的一级水。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。5.1鸭源性成分检测用引物（对）序列为：上游引物：5’-CATCTATCCTGCTAGCCGCC-3’下游引物：5’-GGCTTGAGTGGAAGAATGCC-3’5.2TaqDNA聚合酶。5.3限制性内切酶：StuI酶。5.4dNTP：dATP、dCTP、dGTP、dTTP。5.5食物基因组DNA提取纯化试剂盒。5.6分子量标记：100bp~3000bpDNAMarker。5.7CTAB裂解液：1%CTAB（cetyltrithylammoniumbromide，十六烷基三甲基溴化铵），0.05mol/LTris-HCl（pH8.0）[Tris-：tris(hydroxymethyl)aminomethane，三（羟甲基）氨基甲烷]，0.7mol/LNaCl，0.01mol/LEDTA（pH8.0）(ethylenediaminetetraaceticacid，乙二胺四乙酸)。5.8CTAB沉淀液：CTAB5g/L，氯化钠0.04mol/L，pH8.0，高压灭菌。DBS22/018—201325.9氯化钠溶液：1.2mol/L。5.10蛋白酶K溶液：冻干品，用高压灭菌的去离子水溶解为20mg/mL的溶液，分装后于-20℃保存，避免反复冻融。5.11三氯甲烷、无水乙醇、异丙醇等有机试剂。5.1210×PCR缓冲液：200mmol/LTris-HCl（pH8.4），200mmol/L氯化钾，15mmol/L氯化镁。5.13琼脂糖：电泳纯。5.14电泳缓冲液：Tris54g，硼酸27.5g，0.5mol/LTE缓冲液（pH8.0）20mL，加蒸馏水至1000mL；使用时10倍稀释。5.15溴化乙锭贮存液：用...
