DBS13河北省地方标准DBS13/008—2017食品安全地方标准肉及肉制品中沙门氏菌环介导等温扩增（LAMP）检测方法河北省卫生和计划生育委员会发布2017-11-08发布2018-02-01实施DBS13/008—2017Ⅰ前言本标准按照GB/T1.1-2009规定的格式编写。本标准由河北省卫生和计划生育委员会归口。本标准于2017年11月8日首次发布。DBS13/008—20172食品安全地方标准肉及肉制品中沙门氏菌环介导等温扩增（LAMP）检测方法1范围本标准规定了肉及肉制品中沙门氏菌环介导等温扩增（Loop-mediatedisothermalamplification，LAMP）检测方法。本标准适用于肉及肉制品中沙门氏菌的快速筛选检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4789.1食品安全国家标准食品微生物学检测总则GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3原理根据沙门氏菌属特有的靶序列invA基因设计的两对特殊的内、外引物和一对环引物，特异性识别靶序列上的六个独立区域，利用BstDNA聚合酶（BstDNApolymerase）启动循环链置换反应，在invA基因序列启动互补链合成，在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物；加入SYBRGreenI染料，即可通过颜色变化观察判定结果。叠氮溴化丙锭(propidiummonoazide，PMA)染料能够嵌入细胞外DNA或者穿过非活性菌受损的细胞膜进入细胞进而嵌入其DNA内，但被阻隔在活性菌的完整细胞膜之外。嵌入非活性菌DNA的PMA染料能够在强光照射下通过叠氮基团与DNA进一步形成牢固的共价结合，使其不能在后续的LAMP反应中扩增，因而可在LAMP反应中消除来自于非活性菌的DNA对LAMP检测结果的影响。4仪器和设备除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：4.1冰箱：2℃～5℃，-20℃；4.2恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃；4.3均质器；4.4振荡器；4.5电子天平：感量0.1g；4.6二级生物安全柜；4.7高速台式离心机：5000r/min~16000r/min；4.8水浴锅或加热模块：63℃±1℃，80℃±1℃；4.9微量移液器（0.1μL~2.5μL；0.5μL~10μL；20μL~200μL；100μL~1000μL）和吸头；DBS13/008—201734.10无菌透明离心管：1.5mL；4.11PCR反应管（透明）；4.12水浴振荡器：220r/min，37...
