DBS22吉林省地方标准DBS22/020—2013食品安全地方标准动物源性食品中沙门菌环介导等温扩增（LAMP）检测方法2013-12-31发布2013-12-31实施吉林省卫生和计划生育委员会发布DBS22/020—2013I前言本标准的附录A是资料性附录。本标准起草单位：吉林省畜牧兽医科学研究院。本标准起草人：邵洪泽、王楠、苏双、石春军、刘芳、邢国明、李文东、程荣华、蒋云岩、白翠、许尧、李佳桐。DBS22/020—20131吉林省食品安全地方标准动物源性食品中沙门菌环介导等温扩增（LAMP）检测方法1警告使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题，使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。2范围本标准适用于肉、蛋、奶等动物源性食品中沙门菌的筛选检测。3规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4789.4-2010食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验GB19489-2008实验室生物安全通用要求GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403-2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测4技术概要根据沙门菌属特有的靶序列肠毒素基因序列，设计2对特殊的内、外引物（内引物FIP与BIP，外引物F3与B3），特异性识别靶序列上的六个独立区域，为增加反应速度，还设计1对环引物（LF与LB）。利用Bst酶启动循环链置换反应，在肠毒素基因序列启动互补链合成，在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎环DNA混合物；从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg2+结合，产生副产物（焦磷酸镁）形成白色沉淀，加入显色液，即可通过颜色变化观察判定结果。5引物与试剂5.1特异性引物根据沙门菌的肠毒素基因，设计LAMP检测引物，序列见表1。DBS22/020—20132表1特异性引物浓度及序列引物种类引物名称核苷酸序列F35'-CCTTTCCCGCTATCGGTAAC-3'外引物B35'-GGATGCCCAAAGCAGAGAG-3'FIP5'-GGCCGCCAGGGAACGATTAG-TGATGATAACGCGGTCGGT-3'内引物BIP5'-TTCAACAGCACCTGAGTCAGCC-TTCACGGCGAATGAGACG-3'LF5'-CGTAGAGGCAAAAGAAAGTGGG-3'环引物LB5'-TGTCCGGGTCAGCCTGA-3'5.2试剂5.2.1增菌液——缓冲蛋白胨水（BPW）增菌液，见GB4789.4—2010中A.1。——四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液，见GB4789.4—2010中A.2。——亚硒酸胱氨酸（SC）增菌液，见GB4789.4—2010中A.3。5....
