ICS65.120B20DB41河南省地方标准DB41/T1727—2018饲料中氨基酸的测定高效液相色谱法2018-11-26发布2019-02-26实施河南省质量技术监督局发布河南省地方标准公共服务平台DB41/T1727—2018前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由河南省畜牧局提出并归口。本标准起草单位:河南海瑞正检测技术有限公司、河南牧业经济学院、河南省兽药饲料监察所。本标准主要起草人:兰尊海、单慧燕、易善平、文英会、陈晓鸽、薛宁、许亚楠、李培娜、孙世雯。河南省地方标准公共服务平台DB41/T1727—20181饲料中氨基酸的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、精氨酸、甘氨酸、苏氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、酪氨酸和色氨酸共18种氨基酸的测定方法。本标准适用于饲料原料和饲料中氨基酸含量的测定。酸水解法适用于除色氨酸外其它氨基酸的测定；碱水解法只适用于色氨酸的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18246饲料中氨基酸的测定3原理蛋白质在盐酸或氢氧化钠的作用下，水解成单一氨基酸，水解后的氨基酸与衍生试剂反应，形成稳定的黄色衍生物，经C18色谱柱分离，紫外检测器检测，与氨基酸标准峰比较，按外标法计算各氨基酸的含量。4试剂和材料4.1试剂4.1.1盐酸（HCL）:浓度≥36%，优级纯。4.1.2氢氧化钠（NaOH）:优级纯。4.1.3乙腈（C2H3N）:色谱纯。4.1.4碳酸氢钠（NaHCO3）。4.1.5无水乙酸钠（C2H3NaO2）。4.1.6磷酸二氢钾（KH2PO4）。4.1.7N,N-二甲基甲酰胺（C3H7NO）:色谱纯。4.1.8冰乙酸（CH3COOH）。4.2试剂配制4.2.1盐酸溶液（6mol/L）:取500mL盐酸加水稀释至1000mL，混匀。4.2.2氢氧化钠溶液（5mol/L）:称取200g氢氧化钠，溶于200mL水中，冷却至室温后，用水稀释至1000mL，混匀。河南省地方标准公共服务平台DB41/T1727—201824.2.3平衡缓冲溶液（pH7.0）:称取3.4g磷酸二氢钾加入145.5mL0.1mol/L的氢氧化钠溶液，用水稀释至500mL，混匀，抽滤，贮存于棕色瓶中。4.2.4衍生试剂（1%）:称取1g氟苯，用乙腈溶解稀释至100mL，混匀。4.2.5衍生缓冲液（pH9.0）:称取21.0g碳酸氢钠加入470mL水溶解过滤，加入30mL乙腈于500mL试剂瓶中。4.2.6流动相（0.05mol/L）:称取4.1g无水乙酸钠，加入100mLN，N...
