第五章高效液相色谱法HighPerformanceLiquidChromatographyHPLC25/1/272气相色谱中的“气相”代表什么意思？气相色谱：流动相是气体液相色谱：流动相是液体25/1/273第一节高效液相色谱法的特点一、高效液相色谱法（HPLC）特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。高压：15-35MPa高效：大于30000塔板/米高灵敏：10-9g（紫外检测）、10-11g（荧光检测）25/1/274二、HPLC与GC差别1．分析对象不同GC：适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品；但对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品，尤其对大多数生化样品不可检测GC能检测的物质占有机物总数的20%HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品（包括有机介质溶液），不受样品挥发性和热稳定性的限制，对分子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测HPLC能检测的样品占有机物总数的80%25/1/2752．流动相不同GC：流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相有相互作用。HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起促进作用。且流动相种类较多，选择余地广，改变流动相极性和pH值也对分离起到调控作用，当选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相也可以增大分离选择性。3．操作条件不同HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）GC：加温操作25/1/276三、HPLC的特点和实际应用1、利用其高柱效（n=104塔板/米），有效分离复杂体系中的痕量组分。正相色谱分离有机溶剂中的物质反相色谱分离水溶液中的物质——生化物质。2、用离子型固定相建立的离子交换色谱和离子对色谱法分析离子型待测物的含量。（蛋白质、氨基酸、常见阴阳离子等）3、利用多孔凝胶固定相建立空间排阻色谱法可分离高分子化合物。4、利用手性固定相可以拆分分离具有手性的化合物。25/1/277第二节高效液相色谱仪一、高效液相色谱法流程图贮液器高压泵进样器色谱柱检测器数据处理与显示系统梯度洗脱装置25/1/2781.高压泵HPLC利用高压泵输送流动相通过整个色谱系统。由于色谱柱很细（直径1～6mm），固定相颗粒极细（直径5～10μm），因此柱阻力很大，必须有很高的柱前压力，才能达到快速高效的分离。高压泵应满足以下要求：较高的输出压力，30～50MPa。输出流量精确度高，并有较大调节范围。分析型HPL...
