ICS01.040.67X04DB34安徽省地方标准DB34/T2562—2015大曲酯酶活力的检测酶联免疫法（ELISA）DeterminationofesteraseactivityinDaqu—Enzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)文稿版次选择2015-12-30发布2016-01-30实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T2562—2015I前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省浓香型白酒标准化技术委员会提出并归口。本标准起草单位：安徽瑞思威尔科技有限公司、安徽古井贡酒股份有限公司、安徽农业大学。本标准主要起草人：周庆伍、李安军、蒋军、汤有宏、江昌俊、梁绍勋、李晓欢、何宏魁、吴文睿、刘国英、汪君、李红歌、马侠。DB34/T2562—20151大曲酯酶活力的检测酶联免疫法（ELISA）1范围本标准规定了大曲酯酶活力的检测酶联免疫法。本标准适用于大曲酯酶活力的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1酯酶活力单位esteraseactivityunit在37℃、pH6.0条件下，15min水解α-乙酸萘酯转化为α-萘酚，每产生1nmolα-萘酚为1个酯酶活力单位（U）。4原理试样中的酯酶与微孔中包被的羧酸酯酶抗体结合，在酶标记物的作用下，形成的酶标抗体抗原复合物与显色剂发生反应，用酶标仪测定吸光度，根据吸光度值得出试样中酯酶活力。5试剂和材料5.1本实验所用试剂除非另有说明，均为分析纯，水为符合GB/T6682二级水。5.2酯酶试剂盒：2～8℃冰箱中保存。注：不同品牌的酯酶试剂盒其操作步骤可能有所不同，溶液配制和测试程序等可根据其试剂盒使用说明书略作调整。5.2.1包被羧酸酯酶抗体的聚苯乙烯微量反应板。5.2.2羧酸酯酶标准品：450U/L。5.2.3羧酸酯酶标记物。5.2.4羧酸酯酶标准品稀释液。5.2.5试样稀释液。5.2.6洗板母液。DB34/T2562—201525.2.7显色剂A。5.2.8显色剂B。5.2.9反应终止液。5.3磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）：优级纯。5.4磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）：优级纯。5.5氯化钠（NaCl）：优级纯。5.6磷酸盐缓冲溶液：pH=7.4。分别称取0.62g磷酸二氢钠(5.3)、5.73g磷酸氢二钠(5.4)和9g氯化钠(5.5)，加水溶解至1000mL，在pH计上调节溶液pH=7.4。5.7羧酸酯酶标准溶液：根据酯酶试剂盒（5.2）的线性范围，用羧酸酯酶标准品稀释液（5.2.4）将羧酸酯酶标准品（5.2.2）稀...
