ICS11.220B41备案号：56330-2017DB22吉林省地方标准DB22/T2629—2017猪肠道微孢子虫检测聚合酶链式反应（PCR）法Detectionmethodofpolymerasechainreaction(PCR)ofEnterocytozoonbieneusiinpigs2017–06-12发布2017-08-12实施吉林省质量技术监督局发布DB22/T2629—2017I前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。本标准起草单位：吉林省畜牧兽医科学研究院。本标准主要起草人：曹利利、郭衍冰、姚新华、苑淑贤、程荣华、姚琳、董航、邵洪泽。DB22/T2629—20171猪肠道微孢子虫检测聚合酶链式反应（PCR）法1范围本标准规定了猪肠道微孢子虫PCR检测方法的技术要求。本标准适用于猪肠道微孢子虫的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1猪肠道微孢子病Intestinalmicrosporidiosisofpig由肠道微孢子虫(Enterocytozoonbieneusi)引起的猪的一种以腹泻为主要特征的人兽共患病。4试剂、材料4.1试剂除另有规定，本标准所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682的双重蒸馏水（ddH2O）。4.1.1粪便DNA提取试剂盒4.1.210mg/mL溴化乙锭（EB）溶液（见附录A.1）4.1.350×TAE电泳缓冲液（见附录A.2）4.1.41.5%琼脂糖凝胶（见附录A.3）4.1.5上样缓冲液（见附录A.4）4.1.610×PCR缓冲液（见附录A.5）4.1.7200U或2U/μLTaqDNA聚合酶4.1.810mMdNTPs4.1.9标准分子量DL2000Marker4.1.101.4g/mLCsCl溶液（见附录A.7）4.1.11猪肠道微孢子虫阳性对照：肠道微孢子虫基因组DNA（10ng/μL）。4.1.124条引物序列及浓度见表1。DB22/T2629—20172表1引物序列及浓度引物引物序列使用浓度nmol/μLOUT-F5’-GATGGTCATAGGGATGAAGAGCTT-3’OUT-R5’-AATACAGGATCACTTGGATCCGT-3’IN-F5’-AGGGATGAAGAGCTTCGGCTCTG-3’IN-R5’-AATATCCCTAATACAGGATCACT-3’104.2材料4.2.1离心管（15mL、50mL、1.5mL）4.2.2药品勺4.2.3称量纸4.2.40.2mL薄壁PCR管4.2.5500mL量筒4.2.6500mL锥形瓶4.2.7吸头（10μL、200μL、1000μL）5仪器设备5.1分析天平5.2PCR扩增仪5.3台式低温高速离心机5.4核酸电泳仪5.5紫外凝胶成像仪5.6可调移液器（2μL、20μL、200μL、1000μL）5.7恒温水浴锅...
