GB/T17999.4-1999前言本标准是在我国建立的琼脂扩散试验(AGP)的基础上，并参照美国SPAFAS公司AGP操作规程编制而成。SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准，包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检测方法。本标准为《SPF鸡琼脂扩散试验》。SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分:GB/T17999.1-1999SPF鸡红细胞凝集抑制试验;GB/T17999.2-1999SPF鸡血清中和试验;GB/T17999.3-1999SPF鸡血清平板凝集试验;GB/T17999.5-1999SPF鸡酶联免疫吸附试验;GB/T17999.6--1999SPF鸡胚敏感试验;GB/T17999.7-1999SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验;GB/T17999.8-1999SPF鸡试管凝集试验;GB/T17999.9-1999SPF鸡间接免疫荧光试验。本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出。本标准由农业部畜牧兽医司归口。本标准起草单位:农业部实验动物研究中心、山东省农科院家禽研究所。本标准主要起草人:赵立红、陈德威、张秀美、靳彦华、秦卓明。中华人民共和国国家标准GB/T17999.4一1999SPF鸡琼脂扩散试验SPFchicken--Agargelprecipitationtest范围本标准规定了琼脂扩散试验所用试剂、材料，操作程序及结果判定等。本标准适用于SPF鸡感染以下病毒后的沉淀抗体的监测:禽流感病毒A型(AvianInfluezaVirusTypeA)、传染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus)、传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus)、传染性喉气管炎病毒(InfectiousLaryngotracheitisVirus),禽痘病毒(FowlPoxVirus)、马立克氏病病毒(Marek'sDiseaseVirus)、禽脑脊髓炎病毒(AvianEncephalomyelitisVirus),网状内皮增生症病毒(ReticuloendotheliosisVirus)、禽呼肠孤病毒(病毒性关节炎)(AvianReovirus),禽腺病毒I群(AvianAdenovirusGroupI)、多杀性巴氏杆菌(Paste-11amultocida)2原理琼脂扩散试验是一种沉淀反应互相结合，在最适比例处出现沉淀线伉原、抗体在含有电解质的琼脂凝胶中，可以向四周自由扩散，二者。常采用已知抗原检测相应的沉淀抗体.3试剂和材料3.1试剂3.1.1琼扩抗原。31.2阳性血清。3.1.3被检血清。3.1.40.01M,pH7.2,8%氯化钠磷酸缓冲液。3.1.5优质琼脂粉或琼脂糖。3.2材料I2门琼扩板。3.2.2打孔器12.3移液器。4操作程序4.1琼脂板制备1g优质琼脂粉或0.8g一Ig琼脂糖加人100ml,O.0lM,pH7.2,8%氯化钠磷酸缓冲液中(检测禽流感病毒感染时，同0.O1mol/L,pH6.4的800氯化钠磷酸缓冲液配制琼脂)，水浴加热融化，稍凉(60C-65C)，倒入琼扩板内(厚度为3mm)，待琼脂凝固后，4℃冰箱保存备用。4.2...
