中华人民共和国国家标准GB29989—20132013-11-29发布2014-06-01实施食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定GB29989—20131食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定1范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中左旋肉碱的测定。2原理试样经过水提取，用高氯酸沉淀蛋白质后过滤。滤液经碱皂化后使溶液中结合态的左旋肉碱游离出来。左旋肉碱与乙酰辅酶A在乙酰肉碱转移酶的催化下反应生成乙酰肉碱和游离的辅酶A。游离的辅酶A和2-硝基苯甲酸反应生成黄色物质，其颜色深浅与游离的辅酶A含量成正比。因游离的辅酶A与左旋肉碱是等摩尔反应关系，可间接求出试样中左旋肉碱含量。3试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。3.1试剂3.1.1高氯酸(HClO4)。3.1.2氢氧化钠(NaOH)。3.1.3氢氧化钾(KOH)。3.1.42-硝基苯甲酸(C14H8N2O8S2)。3.1.5N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸(C8H18N2O4S)。3.1.6乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2Na2·2H2O）。3.1.7乙酰辅酶A（AcetylCoA）：在2℃~8℃保存。3.1.8乙酰肉碱转移酶(CAT)：在2℃~8℃保存。3.2试剂配制3.2.1高氯酸溶液（13%）：13mL高氯酸稀释至100mL。3.2.2氢氧化钠溶液（10mol/L）：称取40g氢氧化钠用水溶解，冷却后稀释至100mL。3.2.3氢氧化钾溶液（4.0mol/L）：称取22.4g氢氧化钾用水溶解，冷却后稀释至100mL。3.2.4显色储备液：分别称取50mg2-硝基苯甲酸、5.96gN-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸、185mg乙二胺四乙酸二钠溶于30mL去离子水中，用10mol/LNaOH溶液调pH至7.4～7.6，然后用水定容至50mL。此液置于4℃冰箱中可保存3个月。3.2.5显色工作液：吸取5.0mL显色储备液用水定容至25mL。3.2.6乙酰辅酶A（AcetylCoA）溶液：称取20.0mg乙酰辅酶A溶于2.0mL水中。临用时配制。GB29989—201323.2.7乙酰肉碱转移酶(CAT)溶液：吸取100µL乙酰肉碱转移酶悬浮液，经1500r/min离心10min，弃去上层清液，沉淀用2mL水溶解。临用时配制。3.3标准品左旋肉碱标准品（C7H15NO3）：纯度≥98%。3.4标准溶液配制3.4.1左旋肉碱标准储备液（80µg/mL）：准确称取20mg（精确0.0001g）于102℃±2℃烘箱中烘2h的左旋肉碱，用水定容至250mL容量瓶中。此液置于4℃冰箱中可保存1个月。3.4.2左旋肉碱标准工作液：分别吸取左旋肉碱标准储备液0.5mL、1mL、2mL、3mL、5mL于25mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。此溶液仅限于当天使用。4仪器和设备4.1...
