1第五章细胞融合与单克隆抗体(kàngtǐ)2本章主要内容：细胞融合的基本概念人工(réngōng)诱导细胞融合技术杂种细胞的筛选细胞杂交瘤技术与单克隆抗体人源单克隆抗体3细胞融合（cellfusion)，是指在离体条件下将不同(bùtónɡ)种生物或同种生物不同(bùtónɡ)类型的单细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。细胞融合技术的出现标志着细胞工程的诞生！一、细胞融合的定义(dìngyì)45自发(zìfā)细胞融合（一）细胞膜融合(rónghé)受精过程（二）体内细胞的自发融合1、肌管的形成2、胚胎着床3、巨细胞和破骨细胞的形成4、肿瘤细胞的融合6显微镜下细胞融合过程(guòchéng)7(rónghé)89灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）生物(shēngwù)法：灭活的病毒(bìngdú)（丧失感染性、保留(bǎoliú)抗原结构）10病毒促使(cùsh)ǐ细胞融合的主要步骤：1.两个原生质体或细胞在病毒黏结作用下彼此靠近；2.通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间互相渗透，胞质互相渗透；3.两个原生质体的细胞核互相融合，两个细胞融为一体；4.进入正常的细胞分裂途径，分裂成含有(hányu)ǒ两种染色体的杂种细胞。11化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物（如甘油-醋酸酯、油酸、油胺等）、脂质体（如磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸等）、钙离子、水溶性高分子化合物（如聚乙二醇）、水溶性蛋白质和多肽（如牛血清白蛋白、多聚L-赖氨酸等），其中最常用的是聚乙二醇（PEG）。1、聚乙二醇(PEG)法2、Ca2+法3、溶血(rónɡxuè)卵磷脂优点是易得，用法简单，融合效果稳定。(二)化学方法(fāngfǎ)诱导细胞融合12•PEG的作用机理：由于PEG分子(fēnz)ǐ具有轻微的负极性，故可以与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成H键，从而在在质膜之间形成分子(fēnz)ǐ桥，其结果是使细胞质膜发生粘连进而促使质膜的融合；另外，PEG能增加类脂膜的流动性，也使细胞的核、细胞器发生融合成为可能。•PEG诱导融合的特点：其优点是融合成本低，勿需特殊设备；融合子产生的异核率较高；融合过程不受物种限制。其缺点(quēdin)ǎ是融合过程繁琐，PEG可能对细胞有毒害。13聚乙二醇（PEG）法细胞融合步骤（1）将两种不同(bùtón)ɡ亲本细胞各5×l06混匀；（2）离心沉淀，吸去上清液；（3）加1ml50％PEG溶液，用吸管吹打，使之与细胞接触1分钟；（4）加9ml培养液，离心沉淀，吸去上清液；（5）加...
