食品中丙烯酰胺含量的测定方法 气相色谱-质谱(GC-MS)法 GBT 5009.204-2005.pdf

GB/T5009.204-2005前言本标准的附录A为资料性附录。本标准由安微省产品质量监督检险所提出。本标准由全国食品工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省产品质量监督检验所、国家农业标准化与监测中心（安徽）。本标准主要起草人：程静、卢业举，蒋俊树、沈清、赵成仕、安虹、夏春。GB/T5009.204-2005食品中丙烯酰胺含量的测定方法气相色谱-质谱(GC-MS)法1范围本标准规定了食品中丙烯酰胺按含量的气相色谱-质谱(GC-MS)联机测定方法。本标准适用于食品中丙烯酰胺含量的测定。本标淮方法检出限为7gkg。2原理丙烯洗按(acrylamide)系极性小分子化合物。食品中内希洗按经水、醇类等极性溶剂提取，离心过滤和过柱等净化处理，溴化衍生生成2,3-二溴丙烯酰胺(2,3DBPA),气相色谱-质谱联机分析，图谱参见附录A。主要特征定性离子碎片(m/z):152、150、108、106,其相对丰度比：150：152=1,108：106=1，108:152=0.6,106:150=0.6(各丰度比与标准品相比最大相差20%)。定量离子(m/z):150。定量方法：标准加入法。3试剂除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏超纯水，3.1正己烷：重蒸馏。3.2乙酸乙酯：色谱纯。3.3丙烯酰胺标准品：纯度99%。丙烯酰胺标准溶液：准确称取适量的丙烯酰胺标准样品（精确至0.1mg),用甲醇定容，制备成100g/mL标准储备溶液（储存条件：存放于一20C冰箱中）。根据实验需要再用水稀释成适合浓度的标准使用溶液（储存条件：0C4避光放置，不得超过3d,建议现配现用）3.4无水硫酸钠：650C灼烧4h,干燥器中放置保存。3.5饱和溴水：3%3.6氢溴酸：40%。3.7硫代硫酸钠溶液(0.2mol/L)。3.8甲醇。3.9溴化钾。4仪器和设备4.1气相色谱-质谱仪。4.2振荡器。4.3冷冻离心机(5000r/min10000r/min)。4.4固相提取装置（石墨化碳黑柱，规格为Carbotrap B.SPE柱，500mg/3mL)。4.5粉碎机（或均质机）。4.6精密天平（精度：0.1mg)。1GB/T5009.204-20054.7聚四氟乙烯活塞分液漏斗。4.8具塞三角瓶。4.90.45m有机系过滤膜。5推荐使用仪器条件5.1色谱柱：DB-5ms或柱效相当的色诸柱，30m0.25mm0.25um,5.2色谱柱温度（程序升温）：65保持1min,然后以每分钟升温15直到280C,保持15min,5.3进样口温度：260。5.4离子源温度：230.5.5接口温度：280。5.6离子源：I源，70eV5.7测定方式：选择离子监测方式(SM)或选择离子储存方式(SS)。选择监测离子(m/z):152、150、108、106。5.8载气：氢气(99.999%)，流速1.0mL/min。5.9进样方式：恒流，无分流进样，5.10进样量：1L.6分析步骤6.1提取准确称取已粉碎均匀（或均质化）的四份样品”各10g(梢确至1mg),分别置于250mL具塞三角瓶中，各加入丙烯酰胶标准使用液(10ug/mL):0.0mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL和水共计50mL”,振荡30min,过滤”，取滤液25mL。6.2净化6.2.1将滤液置于聚四氟活塞分液漏斗中，加20mL正己烷，室温下振荡萃取，静置分层，取下层水相。6.2.2将水相进行高速冷冻离心（转速5000r/min10000r/min,时间30min,温度0C4C),上清液用玻璃棉过滤。6.2.3将过滤液直接进行溴化衍生。在过滤液出现浑浊时，应过石墨化碳黑固相萃取柱（柱使用前依次用5mL甲醇和5mL水活化)，再用20mL水淋洗，收集过柱和淋洗后的溶液用于衍生化。6.3衍生化净化后的溶液中加溴化钾7.5g、氢溴酸0.4mL、饱和溴水8mL衍生，在04下放置15h(避光)。逐滴加人硫代硫酸纳溶液至衍生液褪色，加乙酸乙酯25mL,振荡20m,静置分层，收集乙酸乙酯层，加10g左右无水硫酸纳脱水。可根据需要浓缩定容备用。进样前将待测液过0.45m有机系过滤膜净化。6.4测定6.4.1定性分析采用选择监测离子扫描方式(SM)监测在8.4min附近有峰出现，选定的定性离子(m/z):150、152、106、108都出现，且各醉片离子的相对丰度比为：150：152=1、106：108=1、106：150=0.6、108：152=0.6,各丰度比与标准品相比最大相差20%，即可确定样品中含有丙烯酰胺，1)对于含油较多的食品样品，在提取前用适量正己烷预先提取一次以除去大部分油脂。2)可根据样品且体情况调整溶剂使用量，一般溶剂量为样品量的5倍10倍。3)对准以过滤的样品，进行冷冻离心，转速5000r/min10000r/min,时间1min5min,温度0C4C,2