第26卷第4期2009年1】月江苏教育学院学提(自然科学版)JournalofJiangsuInstituteofEducation(NaturalSciences)Vo1．26No．4Nov．，2009植物细胞凋亡的诱导及检测戴谷孙晓莉2(1．江苏教育学院生物系，江苏南京210013；2．南京师范大学生命科学学院，江苏南京210046)摘要本研究以洋葱鳞茎内表皮细胞及大蒜根尖生长点细胞为材料，分别用不同浓度的离子胁迫及过氧化氢诱导处理，观察植物细胞凋亡过程中的形态变化．结果显示：0．4mol／L的NaC1和CaC12处理2小时即可诱导内表皮细胞出现明显的细胞质皱缩，染色质凝聚等凋亡现象；1％H202处理4小时可诱导生长点细胞出现分裂后期染色体桥及间期细胞核膨胀，形成空泡，出现染色质异固缩化等典型的凋亡特征．此研究为细胞凋亡实验教学提供了经济、快捷、有效的诱导和检测方法．关键词细胞凋亡；离子胁迫；过氧化氢；诱导；形态学检测[中图分类号]Q255[文献标识码]A程序性死亡或细胞凋亡(programmedcelldeath，PCO)是多细胞生物体中一些细胞所采取的一种由自身基因调控的主动死亡方式．植物细胞由于覆有细胞壁，难于操作与检测．因此，凋亡研究相对起步较晚．现在许多研究证明，植物中也普遍存在凋亡现象．从个体发育的角度来说，它是植物生长发育的一个基本组成部分；从进化角度来看，则是植物在长期的逆境中获得的一种适应性机制”．本文旨在探讨用不同的方法处理植物细胞以诱导凋亡的产生，以及获得在显微镜下检测凋亡的简易方法，希望为普高本科细胞生物学实验增加新内容．本文在细胞水平通过采用高离子强度及强氧化条件，分别成功诱导洋葱表皮细胞和大蒜根尖生长点细胞发生凋亡现象，并且发现随着离子强度、氧化强度的增强，植物细胞的凋亡现象就越明显．1材料与方法1．1材料和试剂洋葱；大蒜；PBS(磷酸缓冲液)：(NaC1，8g；NazHPO4·2H20，3．6g；KC1，0．2g；KH2PO4，0．24g溶解于1000ml蒸馏水)；4％多聚甲醛(溶于PBS中，pH7．4)；0．5％碱性品红染液；3O％02溶液．1．2方法与步骤1．2．1植物细胞凋亡的诱导1．2．1．1洋葱鳞茎内表皮细胞凋亡的诱导取新鲜洋葱室温下于清水中培养数小时，使其活化．自洋葱鳞茎上切取lem。左右的内表皮若干，分成三组．第一组是正对照，为正常细胞．第二组是试验组，分四管，每管1O片洋葱内表皮，分别于0．1mol／LNaCl，0．2mol／LNaC1，0．3mol／LNaC1，0．4mol／LNaC1中培养．第三组是负对照，为煮沸20rain的坏死细胞．2h后于0．5％碱性品红染液染色20rain后制片．1．2...
