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赤水市人民医院检验科 SOP 文件 输血科SOP文件 （第一版） 二0一0年十一月 目录 1、5% 红细胞悬液的制备………………………………………………1 2、A、B、O血型鉴定……………………………………………………2 3、Rh血型鉴定 ………………………………………………………… 3 4、盐水介质交叉配血………………………………………………… 5 5、凝聚胺交叉配血…………………………………………………… 7 赤 水 市 人 民 医 院 检 验 科 标题： 5% 红细胞悬液的制备 版本号：A 修订号：0 文件编号：XXX-MY-SOP-001 发布日期：2010年10月06日 生效日期：2010年11月01日 发布部门： 编制人： 王兴跃 审核人： 龚光卫 批准人： 页码： 共 1 页 5% 红细胞悬液的制备 一、 制备目的 5% 红细胞悬液一般用于血型鉴定及交叉配血。 二、 试剂与设备 生理盐水、1ml 吸管、试管、离心机 三、 操作步骤 1. 取全血1ml，加等渗盐水2-3ml，充分摇匀离心沉淀，弃去上清液，然后再加生理盐水2-3 ml，按上述方法洗涤，共3次。 2. 最后取压积RBC 5滴，加新鲜等渗生理盐水4 ml，即成5% 红 细胞悬液。（标准RBC 盐水悬液最多存放3天，用ACD溶液冷藏保存最长1周） - 1 - 赤 水 市 人 民 医 院 检 验 科 标题：A、B、O血型鉴定 版本号：A 修订号：0 文件编号：XXX-MY-SOP-002 发布日期：2010年10月06日 生效日期：2010年11月01日 发布部门： 编制人： 王兴跃 审核人： 龚光卫 批准人： 页码： 共 2 页 A、B、O血型鉴定 一、方法 试管法 二、原理 1． 正定型：用标准抗-A、抗-B分型血清测定红细胞上有无A抗原或B抗原来确定ABO血型。 2． 反定型：用已知有A抗原、B抗原及H抗原的红细胞测定血清中有无抗-A、抗-B来确定ABO血型。 三、试剂与材料 1.标准抗-A、抗-B血清。 2.标准A、B、O型红细胞：取健康献血员之A、B、O三种血型的红细胞各3份，用生理盐水洗涤3次，分型混合，用红细胞保养液配制成5%悬液，经标准抗血清鉴定特异性合格，分装4℃保存。 3.受检者5%红细胞悬液及其血清。 四、操作程序 1． 正定型：取试管2支，分别标明抗A、抗B，并分别加入标准的抗A、抗B血清各2滴，加受检者的5%红细胞悬液各2滴，离心1000rpm一分钟，先观察试管中上清液有否溶血，然后轻摇试管，肉眼及显微镜观察是否凝集，按下表报告结果。 2． 反定型：取试管3支，分别标明A、B、O，并分别加入5%标准A、B、O型红细胞悬液各2滴，加受检者的血清每管2滴，离心1000rpm一分钟，先观察试管中上清液有否溶血，然后轻摇试管，肉眼及显微镜观察是否凝集，按下表报告结果。 ABO血型正反定型结果判断 （“+”为凝集，“-”为不凝集） 分型血清+受检者红细胞 受检者血型 受检者血清+标准红细胞 抗-A血清 抗-B血清 A型红细胞 B型红细胞 O型红细胞 + - - + - - + + A B O AB - + - + - - + + - - - - 五、质量保证措施 1.分型血清质量效能符合要求，用毕速放冰箱4℃保存，以免效价下降及细菌污染。 2.试剂红细胞以二个健康者同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤。 3.所用试管、滴管、破片要清洁干燥，防止溶血。 4.操作时应先加血清、再加红细胞恳液，以免使血清中抗体被稀释。 5.离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性出现。 6.如室温过低，应将试管放入37℃水浴箱中保温。 7.判断结果应仔细核对、记录、避免笔误。 六、临床意义 1.防止输ABO血型不合，引起输血反应。临床上多采用正向定型，只有结果可疑时再做反向定型。 2.避免ABO血型不合，引起器官移植中的超急性排斥。 3.用于母子血型不合，引起新生儿溶血病的诊断。 4.用于可疑血迹，毛发和亲缘鉴定，以及与某些疾病相关的调查等。 七、参考资料 1．«全国临床检验操作规程»第二版 2．试剂盒说明书 标题：Rh血型鉴定 版本号：A 修订号：0 文件编号：XXX-MY-SOP-003 发布日期：2010年10月06日 生效日期：2010年11月01日 发布部门： 编制人： 王兴跃 审核人： 龚光卫 批准人： 页码： 共 2 页 Rh血型鉴定 一、 方法：试管法 应用标准抗-D血清与被检红细胞发生凝集与否而定，发生凝集者即有D抗原，为Rh阳性，反之则为Rh阴性。 二、试剂与材料 1． 标准Rh抗血清：抗-D。 2． 受检者5%红细胞悬液。 三、操作程序 1． 取试管1支，作抗D标记，加入抗-D血清2滴，再加受检者5%红细胞悬液2滴，混匀后离心1000rpm一分钟，观察凝集结果。 2． 结果判断：凝集为Rh阳性，不凝集为Rh阴性。 四、质量保证措施 1． 如抗-D检测管不凝集，应进一步用抗人球蛋白试验证实，以排除Du的因素。 2． Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，同时由于Rh抗原、抗体凝集反应的凝块比较疏松，观察结果时应轻轻转动试管，不要用力摇动。 3． 为避免发生假阴性，受检者红细胞应新鲜。 4．阳性对照取3人O型红细胞混和配成。阴性对照一般应选择AB型血清一滴，测定时加5％阳性红细胞悬液一滴和试剂一滴混匀，。 5．抗D试剂质量效能正常,在有效期内使用。 五、临床意义 1.血型不合输血引起的溶血反应：“天然”产生的RH抗体极为少见，几乎所有的Rh抗体都是由于输入血型不合的血液或胎母Rh血型不合等同种免疫作用而产生的。因机体已产生Rh抗体．在输入Rh血型不合的血液时，将会发生溶血性输血反应，甚至导致死亡。 2.新生儿溶血病： 若胎儿与母亲Rh抗原不同，母亲受到胎儿血液中不配合的血型抗原刺激，可以产生相应的血型抗体。大约5％的Rh阴性产妇含有抗D抗体。如果发生在第一胎，一般对胎儿无明显影响。如再次妊娠Rh阴性胎儿时，可产生新生儿溶血病。 六、参考资料：1．«全国临床检验操作规程»第二版； 2．试剂盒说明书 标题：盐水介质交叉配血 版本号：A 修订号：0 文件编号：XXX-MY-SOP-004 发布日期：2010年10月06日 生效日期：2010年11月01日 发布部门： 编制人： 王兴跃 审核人： 龚光卫 批准人： 页码： 共 2 页 盐水介质交叉配血 一、方法 盐水介质交叉配血法 二、原理 用以检测受血者（献血者）血清（浆）中有无破坏献血者（受血者）红细胞的抗体。如存在相应的抗体，则交叉管中将发生凝集或溶血现象，此即为交叉不合，反之则为相合。 三、试剂与材料 1．受血者血清（浆） 2．受血者5%红细胞悬液 3．献血者血清（浆） 4．献血者5%红细胞悬液 四、操作程序 见下表： 主 管 次 管 受血者血清（浆） （滴） 2 / 受血者5%红细胞悬液 （滴） / 2 献血者血清（浆） （滴） / 2 献血者5%红细胞悬液 （滴） 2 / 混匀，离心1000~2000rpm 1~2分钟，肉眼及显微镜观察结果。 五、结果判断 1． 主、次、混合管均无凝集、无溶血现象，表示无配血禁忌，可 以输血。 2． 主、次、混合管均有凝集和/或溶血现象，表示有配血禁忌，绝不可输血。 六、临床意义 减少临床输血反应,减轻病人输血危险,提高输血质量 七、质量保证措施 1．先核病人姓名，标本是否合格，试管上联号与化验单上联号是否相同，是否有抽血者姓名，以防血标本混调。 2．病人血液及献血员红细胞配成5%左右红细胞悬液，不要太浓太稀。 3．必须做正反血型鉴定保证ABO血型。 4．结果观察时，除肉眼观察外，尚需显微镜观察。 5．要注意真、假凝集的鉴别。 八、参考资料 1．«全国临床检验操作规程»第二版 标题：凝聚胺交叉配血 版本号：A 修订号：0 文件编号：XXX-MY-SOP-005 发布日期：2010年10月06日 生效日期：2010年11月01日 发布部门： 编制人： 王兴跃 审核人： 龚光卫 批准人： 页码： 共 2 页 凝聚胺交叉配血 一、方法 凝聚胺介质交叉配血 二、 原理 凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM）降低介质的离子强度，减少RBC周围的阳离子云，以促进RBC和血清（浆）中的抗体结合；其后加入凝聚胺（Polybrene）溶液，以中和RBC表面带有的负电荷，使RBC产生非特异性的凝集；最后加入悬浮液（Resuspending），中和凝聚胺的作用，使正常的RBC非特异性凝集散开，结果为阴性。如果RBC被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，结果为阳性。 三、试剂组成 1． LIM（Low Ionic Medium）： 葡萄糖、EDTA（2Na） 2． Polybrene Solution（黑色瓶）： Polybrene、NaCL 3． Resuspending Solution（白色瓶）：柠檬酸钠、葡萄糖 4． Positive Control： 抗-D 四、操作程序 1． 取试管二支，标明主、次侧，主侧管加病人血清（浆）2滴，加供血者5%RBC悬液（洗涤或不洗涤均可）2滴；次侧管加病人5%RBC悬液2滴及供血者血浆2滴。 2． 各加LIM0.6ml（吸管12滴），混匀，再各加Polybrene（黑色瓶）2滴，混匀后离心3400rpm10秒，倒掉上清液，留约0.1mL液体。 - 9 - 3． 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。 4． 最后各加入2滴Resuspending（白色瓶），轻轻转动试管混合，并同时观察结果。 五、结果判断 1．如果在30秒内凝集散开，表示是由Polybrene引起的非特异性聚集，配血结果相合。 2．如果在30秒内凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异