·实验研究/论著·高铜通过转录水平上调LC3表达诱导肝癌HepG2细胞自噬的研究张萌,石萌,南欣睿,张杰,杜文倩,李超,刘宝琴中国医科大学生命科学学院,辽宁沈阳110122摘要:目的探究微量元素铜对肝癌HepG2细胞自噬水平的影响,解析铜离子诱导肝癌自噬的分子机制。方法0、10、50、100和200μmol/L硫酸铜(CuSO4)处理HepG2细胞24h,100μmol/LCuSO4处理HepG2细胞0、4、8、12、24h后检测自噬相关蛋白表达,蛋白质印迹法检测HepG2细胞内自噬分子标志物LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和p62,以及线粒体自噬标志分子Parkin表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LC3Ⅱ和p62mRNA表达,细胞计数试剂盒检测细胞活力。RFP-GFP荧光双标LC3慢病毒系统感染HepG2细胞,CuSO4处理表达RFP-GFP-LC3B的HepG2细胞,共聚焦检测自噬流变化。结果10、50、100、200μmol/LCuSO4作用HepG2细胞后,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值呈剂量(F=6519.000,P<0.001)和时间依赖性升高(F=934.300,P<0.001);p62蛋白表达呈剂量(F=55564.000,P<0.001)和时间依赖性降低(F=11413.000,P<0.001)。共聚焦结果显示铜离子蓄积诱导HepG2细胞内自噬小体数目(t=30.040,P<0.001)及自噬溶酶体数目(t=272.000,P<0.001)均增加。100μmol/LCuSO4引起HepG2细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加(t=103.600,P<0.001);p62蛋白表达下降(t=146.600,P<0.001),EBSS也引起p62蛋白表达下降(t=146.000,P<0.001);而对Parkin蛋白表达没有影响。100μmol/LCuSO4作用HepG2细胞24h后LC3ⅡmRNA表达上调,而EBSS饥饿处理则不影响LC3ⅡmRNA表达,F=302.400,P<0.001;p62mRNA表达均一定程度上调,F=61.750,P<0.001。细胞计数实验结果表明100μmol/LCuSO4和EBSS饥饿均使细胞活力降低,F=111.700,P<0.001。结论高铜能够通过转录水平上调LC3Ⅱ分子mRNA表达诱导肝癌HepG2细胞内自噬增强。关键词:肝癌;铜稳态;LC3;自噬;p62中图分类号:R735.7文献标识码:A文章编号:1673-5269(2022)24-1734-07HighcopperinducesautophagyofHepG2cellsbyup-regulatingLC3expressionattranscriptionallevelZHANGMeng,SHIMeng,NANXin-rui,ZHANGJie,DUWen-qian,LIChao,LIUBao-qinSchoolofLifeSciences,ChinaMedicalUniversity,Shenyang110122,ChinaAbstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectoftraceelementcopperonautophagyofHepG2cells,andtoelucidatethemolecularmechanismofcopper-inducedautophagyofHepG2cells.MethodsCoppersulfate(CuSO4)atconcentrationof0,10,50,100and200μmol/LwasusedtotreatHepG2cellsfor2...
