动物医学进展,2023,44(2):8-14ProgressinVeterinaryMedicine猪肺炎支原体、猪圆环病毒2型和3型多重荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用收稿日期:2022-03-10基金项目:柳州市科技计划项目(2020NACB0804);南宁市科学研究与技术开发计划项目(20202090);南宁市优秀青年科技人才项目(RC20190102);贵港市科学研究与技术开发计划项目(桂科计2117003)作者简介:肖婷(1998-),女,湖南岳阳人,硕士研究生,主要从事基础兽医学研究;何颖(1979-),女,广西柳州人,兽医师,博士,主要从事动物病毒学研究。△同等贡献作者。*通讯作者肖婷1,2△,何颖2△,赵硕2,蒋家霞3,陈忠伟2,郭旋4,卢冰霞2,林昌华5,赵武2,秦毅斌2,段群棚2,全琛宇2,许心婷2,陈婷婷2,许艺兰2,胡庭俊1*,张宁5,6*(1.广西大学动物科学技术学院,广西南宁530004;2.广西兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室,广西南宁530001;3.广西农垦永新畜牧集团新兴有限公司,广西柳州545000;4.广西农垦永新畜牧集团金光有限公司,广西南宁530042;5.广西农垦永新畜牧集团西江有限公司,广西贵港537100;6.广西桂垦牧业有限公司,广西南宁530022)摘要:为建立一种快速、特异的猪肺炎支原体(Mhp)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的多重荧光定量PCR鉴别检测方法,根据Mhp、PCV2和PCV3及β-actin基因保守区域序列,设计合成4对特异性引物及4种荧光基团标记的TaqMan探针。构建含有各目的基因的重组质粒标准品,筛选引物,优化反应条件,成功建立多重荧光定量PCR后评价该方法的特异性、敏感性、重复性并将该方法初步应用于临床样品检测。结果显示,该方法能同时特异性地鉴别检测Mhp、PCV2和PCV3,检测PRRSV、CS-FV、PRV、JEV、PPV、PEDV、TGEV、FMDV病毒核酸无交叉反应;对Mhp、PCV2、PCV3和β-actin标准质粒的最小检出量分别为26.4、66.7、25.6、5990copies/μL;该方法重复性好,组间和组内试验变异系数低于1.5%;用该方法检测101份临床样本,Mhp、PCV2和PCV3阳性率分别为20.8%、36.6%和33.7%。建立的多重荧光定量PCR方法能同时快速和定量检测Mhp、PCV2和PCV3,较普通PCR更敏感,实用性强,有效避免了多次检测耗时长、费用高的问题,为Mhp、PCV2和PCV3的监测和防控提供了可靠的检测技术。关键词:猪肺炎支原体;猪圆环病毒2型;猪圆环病毒3型;多重荧光定量PCR中图分类号:S854.4文献标识码:A文章编号:1007-5038(2023)02-0008-07猪支原体肺炎(Mycoplasmalpneumoniaofswine,MPS)是由猪肺炎支原体(Mycoplasmahyo-pneumoniae,Mhp)引起的一种慢性呼...
